Extension des normes des sites d'insertion d'intégration lentivirale

Les vecteurs lentiviraux (LV) sont modifiés à partir du virus de l'immunodéficience humaine (VIH-1). Ils peuvent transmettre de grandes quantités d’informations génétiques aux cellules hôtes et s’intégrer au génome cellulaire, permettant ainsi une expression stable pendant des générations. De plus, comme leurs gènes de virulence ont été supprimés, ils peuvent être utilisés comme virus pseudotypés en laboratoire avec une relative sécurité. Les vecteurs lentiviraux peuvent transfecter divers types de cellules, y compris des cellules difficiles à transfecter telles que les cellules primaires.

Application du lentivirus à la thérapie cellulaire CAR-T

Le virus lentiviral est actuellement la méthode de transduction principale pour le CAR-T (environ 90 % des produits CAR-T approuvés par la FDA utilisent le LV). L'intégration lentivirale dans les cellules est semi-aléatoire (préférant les régions transcriptionnellement actives).

1. Les lentivirus reconnaissent les récepteurs de la surface de l'hôte et transportent l'ARN et les protéines dans les cellules ;

2. L'ARN viral est transcrit de manière inverse pour former un ADNc double brin linéaire (contenant des séquences LTR aux deux extrémités)

3.Integrase reconnaît le LTR et l'ADNc est intégré dans le génome de l'hôte ;

4.Le gène exogène continue d’être exprimé à mesure que la cellule hôte se divise.

L'analyse du site d'intégration (ISA) est une étape critique dans le développement clinique et le suivi post-commercialisation des produits de thérapie génique (tels que CAR-T). Les exigences réglementaires sont établies par les agences de réglementation nationales (par exemple, la FDA et l'EMA) et visent à évaluer les risques potentiels de l'intégration génomique (par exemple, mutagenèse insertionnelle et expansion clonale).

Les méthodes actuelles de détection de l’ISA comprennent la LM-PCR, le NGS et le séquençage unicellulaire. Pour garantir l'exactitude, CobiBio a développé une série de normes de sites d'intégration lentivirales à utiliser par les institutions de test, servant de référence de qualité pour évaluer les capacités de détection. Dans l'article précédent, « Les normes des sites d'intégration lentivirales arrivent », nous avons fourni des descriptions de produits et une présentation des données pour les sites d'insertion multiples monoclonaux, les sites d'insertion monoclonaux uniques et les sites d'insertion de chromosomes sexuels. CB-Gene a récemment lancé un étalon de référence lentiviral polyclonal multi-sites d'intégration avec une fréquence d'intégration de 5 % à 2 %. Ce standard de référence, dérivé d'un mélange de plusieurs produits de sites d'intégration monoclonaux, couvre 20 sites d'insertion provenant de 20 gènes sur 11 chromosomes différents, comme le montre le tableau ci-dessous.

Figure 1. Distribution des gènes

Figure 2. Distribution chromosomique