लेंटीवायरल इंटीग्रेशन इंसर्शन साइट मानक विस्तार

लेंटीवायरल वैक्टर (एलवी) को मानव इम्युनोडेफिशिएंसी वायरस (एचआईवी-1) से संशोधित किया गया है। वे मेजबान कोशिकाओं में बड़ी मात्रा में आनुवंशिक जानकारी पहुंचा सकते हैं और कोशिका जीनोम में एकीकृत कर सकते हैं, जिससे पीढ़ियों तक स्थिर अभिव्यक्ति संभव हो सकती है। इसके अलावा, क्योंकि उनके विषैले जीन को हटा दिया गया है, उन्हें सापेक्ष सुरक्षा के साथ प्रयोगशाला में छद्म रूप वाले वायरस के रूप में उपयोग किया जा सकता है। लेंटीवायरल वैक्टर विभिन्न प्रकार की कोशिकाओं को संक्रमित कर सकते हैं, जिनमें प्राथमिक कोशिकाओं जैसी कठिन-से-संक्रामक कोशिकाएं भी शामिल हैं।

सीएआर-टी सेल थेरेपी में लेंटवायरस का अनुप्रयोग

लेंटीवायरल वायरस वर्तमान में सीएआर-टी के लिए मुख्यधारा ट्रांसडक्शन विधि है (एफडीए-अनुमोदित सीएआर-टी उत्पादों में से लगभग 90% एलवी का उपयोग करते हैं)। कोशिकाओं में लेंटिवायरल एकीकरण अर्ध-यादृच्छिक है (ट्रांसक्रिप्शनल रूप से सक्रिय क्षेत्रों को प्राथमिकता देते हुए)।

1.लेंटीवायरस मेजबान सतह रिसेप्टर्स को पहचानते हैं और आरएनए और प्रोटीन को कोशिकाओं में पहुंचाते हैं;

2.वायरल आरएनए को रैखिक डबल-स्ट्रैंडेड सीडीएनए (दोनों सिरों पर एलटीआर अनुक्रम युक्त) बनाने के लिए रिवर्स ट्रांसक्राइब किया जाता है।

3. इंटीग्रेज़ एलटीआर को पहचानता है, और सीडीएनए मेजबान जीनोम में एकीकृत होता है;

4. मेजबान कोशिका के विभाजित होने पर बहिर्जात जीन व्यक्त होता रहता है।

एकीकरण साइट विश्लेषण (आईएसए) जीन थेरेपी उत्पादों (जैसे सीएआर-टी) के नैदानिक ​​विकास और विपणन के बाद की निगरानी में एक महत्वपूर्ण कदम है। नियामक आवश्यकताएं राष्ट्रीय नियामक एजेंसियों (उदाहरण के लिए, एफडीए और ईएमए) द्वारा स्थापित की जाती हैं और इसका उद्देश्य जीनोमिक एकीकरण (उदाहरण के लिए, सम्मिलन उत्परिवर्तन और क्लोनल विस्तार) के संभावित जोखिमों का आकलन करना है।

वर्तमान आईएसए पहचान विधियों में एलएम-पीसीआर, एनजीएस और एकल-कोशिका अनुक्रमण शामिल हैं। सटीकता सुनिश्चित करने के लिए, कोबीबियो ने परीक्षण संस्थानों द्वारा उपयोग के लिए लेंटिवायरल एकीकरण साइट मानकों की एक श्रृंखला विकसित की है, जो पहचान क्षमताओं का आकलन करने के लिए गुणवत्ता बेंचमार्क के रूप में कार्य करती है। पिछले लेख, 'लेंटीवायरल इंटीग्रेशन साइट स्टैंडर्ड्स आ रहे हैं' में हमने मोनोक्लोनल मल्टीपल इंसर्शन साइट्स, मोनोक्लोनल सिंगल इंसर्शन साइट्स और सेक्स क्रोमोसोम इंसर्शन साइट्स के लिए उत्पाद विवरण और डेटा प्रस्तुति प्रदान की थी। सीबी-जीन ने हाल ही में 5% से 2% की एकीकरण आवृत्ति के साथ एक लेंटिवायरल पॉलीक्लोनल मल्टी-एकीकरण साइट संदर्भ मानक लॉन्च किया है। कई मोनोक्लोनल एकीकरण साइट उत्पादों के मिश्रण से प्राप्त यह संदर्भ मानक, 11 विभिन्न गुणसूत्रों पर 20 जीनों से 20 सम्मिलन साइटों को कवर करता है, जैसा कि नीचे दी गई तालिका में दिखाया गया है।

चित्र 1. जीन वितरण

चित्र 2. गुणसूत्र वितरण