एकल एचएलए लोकस संदर्भ मानक

पृष्ठभूमि

मानव ल्यूकोसाइट एंटीजन (HLA) अणु मनुष्यों के गुणसूत्र 6 की छोटी भुजा पर स्थित होते हैं। यह प्रतिरक्षा प्रतिक्रिया में शामिल लगभग 3.6M का एक बहुरूपी क्षेत्र है, जिसमें 200 से अधिक जीन शामिल हैं। समान जुड़वां बच्चों को छोड़कर, समान एचएलए वाले लोगों को ढूंढना लगभग असंभव है। हर किसी का एचएलए बहुत भिन्न होता है, जो इसे अब तक खोजी गई सबसे जटिल आनुवंशिक प्रणाली बनाता है। वर्तमान में, आईपीडी-आईएमजीटी/एचएलए डेटाबेस में 38,008 एलील (संस्करण 3.55, 2024-01) शामिल हैं।

एकल एचएलए लोकस जीनोटाइपिंग मानक क्या है?

एक एकल एचएलए लोकस जीनोटाइपिंग मानक एक जैविक नमूने (आमतौर पर डीएनए या एक सेल लाइन) को संदर्भित करता है जिसका एक विशिष्ट एचएलए लोकस (जैसे एचएलए-बी) के लिए जीनोम अनुक्रम को स्वर्ण मानक तरीकों (जैसे अनुक्रमण) का उपयोग करके अंतरराष्ट्रीय स्तर पर मान्यता प्राप्त संस्थानों द्वारा सटीक रूप से पहचाना और मान्यता दी गई है।

मुख्य विशेषताएं:

स्थान-विशिष्ट: एक विशिष्ट एचएलए स्थान पर परिणाम टाइप करने के लिए जिम्मेदार।

ज्ञात और स्पष्ट: जीनोटाइप 100% निश्चित है और आम तौर पर उस स्थान पर सबसे आम या प्रतिनिधि प्रकार का प्रतिनिधित्व करता है।

उच्च सटीकता: टाइपिंग परिणामों को कई प्लेटफार्मों और प्रयोगशालाओं में बार-बार मान्य किया गया है और उन्हें उस प्रकार के लिए 'सत्य' या 'स्वर्ण मानक' माना जाता है।

HLA प्रणाली में तीन क्षेत्र शामिल हैं

वर्ग I क्षेत्र HLA-A, -B, और -C जैसे जीन से मेल खाता है, और वर्ग I अणुओं की अल्फा श्रृंखला को एन्कोड करता है। वर्ग I अणुओं के बीटा 2 माइक्रोग्लोबुलिन को गैर-एचएलए क्षेत्रों में जीन द्वारा एन्कोड किया गया है। इसमें गैर-शास्त्रीय HLA-E, -F, और -G भी शामिल हैं।

वर्ग II क्षेत्र HLA-DR, -DQ, और -DP जैसे जीन से मेल खाता है, और अल्फा चेन जीन (A1) और बीटा चेन जीन (B1) को एनकोड करता है। अल्फा श्रृंखला और बीटा श्रृंखला मिलकर एक कार्यात्मक एचएलए अणु बनाते हैं। अधिकांश व्यक्तियों में एक अतिरिक्त DRB जीन (DRB3 या DRB4 या DRB5) होता है, जो एक अलग बीटा श्रृंखला को एन्कोड करता है जो अल्फा श्रृंखला के साथ जुड़ सकता है।

तृतीय श्रेणी क्षेत्र, जिसमें जीन पूरक प्रणाली प्रोटीन और टीएनएफ परिवार जीन को कूटबद्ध करते हैं।

पता लगाने का महत्व

एचएलए वर्ग आईए, बी, सी लोकी और वर्ग II डीआर, डीक्यू लोकी एलील्स का टाइपिंग टेस्ट हेमेटोपोएटिक स्टेम सेल प्रत्यारोपण, अस्थि मज्जा प्रत्यारोपण, और अन्य ऊतक और अंग प्रत्यारोपण जैसे यकृत और गुर्दे के दाता-प्राप्तकर्ता मिलान में महत्वपूर्ण भूमिका निभाता है। दाता और प्राप्तकर्ता के बीच एचएलए जीनोटाइप मिलान की डिग्री प्रत्यारोपण प्राप्तकर्ता की दीर्घकालिक जीवित रहने की दर को महत्वपूर्ण रूप से प्रभावित करती है। मिलान की डिग्री जितनी अधिक होगी, दीर्घकालिक जीवित रहने की दर उतनी ही अधिक होगी। एचएलए जीनोटाइप मुख्य रूप से पांच लोकी एचएलए-ए, बी, सी, डीआरबी1 और डीक्यूबी1 को संदर्भित करता है। एचएलए जीनोटाइपिंग एक हेमेटोपोएटिक स्टेम सेल डोनर लाइब्रेरी स्थापित करने और एचएलए जनसंख्या आनुवंशिक बहुरूपता विश्लेषण आयोजित करने में मदद कर सकती है। हाल के वर्षों में, चाइना बोन मैरो बैंक सक्रिय रूप से उच्च-स्कोर प्रविष्टि की वकालत कर रहा है, यानी एचएलए-ए, बी, सी, डीआरबी 1 और डीक्यूबी 1 जैसे पांच जीन लोकी पर 4-बिट उच्च-रिज़ॉल्यूशन टाइपिंग परीक्षण, ताकि एचएलए मिलान की दक्षता में मौलिक सुधार हो सके।

साथ ही, HLA-I वर्ग B लोकी जैसे B27 और B5801 जीनोटाइपिंग भी व्यक्तिगत दवा चयन में महत्वपूर्ण भूमिका निभाते हैं, जैसे एंकिलॉज़िंग स्पॉन्डिलाइटिस का सहायक निदान और गाउट दवा का मार्गदर्शन। एचएलए-बी*1502 को हान आबादी में मिर्गी-रोधी दवा कार्बामाज़ेपिन लेने के कारण होने वाले स्टीवन जॉनसन सिंड्रोम से भी जुड़ा हुआ दिखाया गया है।

प्रमुख विशेषताऐं

1.एचएलए टाइपिंग में 11 लोकी एबीसी डीआरबी1/3/4/5 डीपीए1 डीपीबी1 डीक्यूए1 डीक्यूबी1, अल्ट्रा-हाई रेजोल्यूशन टाइपिंग का अपेक्षाकृत पूरा सेट शामिल है;

2. संपूर्ण जीनोम डीएनए प्रारूप, जिसमें एक्सॉन और इंट्रॉन शामिल हैं;

3.पीसीआर-एसबीटी या तीसरी पीढ़ी की अनुक्रमण पहचान, टाइपिंग अनुक्रम की सटीक पुष्टि;

4.मानव कोशिका पृष्ठभूमि, नैदानिक ​​नमूनों का बेहतर अनुकरण, और प्रतिलिपि प्रस्तुत करने योग्यता;

5. सतत और स्थिर आपूर्ति, छोटे बैच-टू-बैच अंतर;

6.ISO90001 सिस्टम प्रमाणन, प्रथम श्रेणी उत्पाद गुणवत्ता।

सिंगल-लोकस एचएलए जीनोटाइपिंग मानकों का प्राथमिक कार्य क्या है?

*गुणवत्ता नियंत्रण और सत्यापन: यह सबसे महत्वपूर्ण कार्य है। प्रयोगशालाएँ हर बार HLA टाइपिंग प्रयोग चलाने पर मानकों का परीक्षण करती हैं। यदि मानकों के परीक्षण परिणाम ज्ञात मूल्यों से भिन्न होते हैं, तो यह प्रयोगात्मक प्रक्रिया (डीएनए निष्कर्षण और पीसीआर प्रवर्धन से अनुक्रमण या संकरण तक) में संभावित संदूषण, अभिकर्मक विफलता या परिचालन त्रुटि को इंगित करता है। परिणाम अविश्वसनीय हैं और इनका पुनः परीक्षण किया जाना चाहिए।

*अंशांकन और मानकीकरण: विभिन्न प्रयोगशालाओं द्वारा, विभिन्न किट ब्रांडों का उपयोग करके और विभिन्न अनुक्रमण प्लेटफार्मों पर प्राप्त परिणाम भिन्न हो सकते हैं। एकीकृत मानक का उपयोग करने से दुनिया भर की प्रयोगशालाओं को अपने सिस्टम को कैलिब्रेट करने में मदद मिलती है, जिससे यह सुनिश्चित होता है कि 'प्रयोगशाला ए द्वारा रिपोर्ट किया गया ए*02:01' और प्रयोगशाला बी द्वारा रिपोर्ट किया गया 'ए*02:01' बिल्कुल एक ही चीज़ को संदर्भित करते हैं, इस प्रकार मानकीकृत और तुलनीय परिणाम प्राप्त होते हैं। यह अस्थि मज्जा बैंक मिलान जैसे अंतर्राष्ट्रीय सहयोग के लिए महत्वपूर्ण है।

*नई विधि/परीक्षण किट मूल्यांकन: एक नई एचएलए टाइपिंग तकनीक या वाणिज्यिक किट विकसित करते समय, इसकी सटीकता, संवेदनशीलता और विशिष्टता का आकलन करने के लिए एक ज्ञात मानक का उपयोग करके प्रदर्शन सत्यापन आवश्यक है।

*कार्मिक प्रशिक्षण और मूल्यांकन: नए तकनीशियनों को प्रशिक्षित करने और उनके संचालन और परिणाम व्याख्या क्षमताओं का आकलन करने के लिए उपयोग किया जाता है।

सिंगल-लोकस एचएलए जीनोटाइपिंग मानक किन बीमारियों से जुड़े हैं?

एचएलए टाइपिंग स्वयं विभिन्न प्रकार की बीमारियों से निकटता से जुड़ी हुई है। इसलिए, गुणवत्ता आश्वासन मानक के रूप में, यह अप्रत्यक्ष रूप से इन रोगों के निदान, अनुसंधान और उपचार से भी संबंधित है।

1. अंग और हेमटोपोइएटिक स्टेम सेल प्रत्यारोपण:

यह सर्वाधिक प्रत्यक्ष रूप से प्रासंगिक क्षेत्र है। प्रत्यारोपण की सफलता की कुंजी दाता और प्राप्तकर्ता के बीच एचएलए अनुकूलता में निहित है। यहां तक ​​कि थोड़ी सी टाइपिंग त्रुटि भी गंभीर प्रतिरक्षा अस्वीकृति या ग्राफ्ट-बनाम-होस्ट रोग (जीवीएचडी) का कारण बन सकती है, जो जीवन के लिए खतरा हो सकता है। इसलिए, एचएलए टाइपिंग की सटीकता प्रत्यारोपण की सफलता की आधारशिला है, और इस संबंध में मानकों की भूमिका अपूरणीय है।

2. स्वप्रतिरक्षी रोग:

कई ऑटोइम्यून बीमारियाँ विशिष्ट एचएलए प्रकारों से दृढ़ता से जुड़ी हुई हैं। उदाहरण के लिए:

* एंकिलॉज़िंग स्पॉन्डिलाइटिस (एएस) एचएलए-बी*27 से दृढ़ता से जुड़ा हुआ है।

* रुमेटीइड गठिया (आरए) एचएलए-डीआरबी1*04:01 जैसे प्रकारों से जुड़ा है।

* टाइप 1 मधुमेह और सीलिएक रोग भी विशिष्ट एचएलए प्रकारों से जुड़े हैं। सटीक एचएलए टाइपिंग इन बीमारियों के निदान और जोखिम की भविष्यवाणी में सहायता करती है।

3. प्रतिकूल दवा प्रतिक्रियाएँ:

कुछ दवाएं विशिष्ट एचएलए जीनोटाइप के वाहकों में गंभीर या घातक प्रतिकूल प्रतिक्रियाएं पैदा कर सकती हैं। उदाहरण के लिए:

*एलोप्यूरिनॉल (एक एंटीगाउट दवा) के कारण होने वाली गंभीर त्वचा प्रतिक्रियाएं HLA-B*58:01 से जुड़ी हैं।

*कार्बामाज़ेपाइन (एक मिर्गी-रोधी दवा) HLA-B*15:02 से संबद्ध है।

इन दवाओं को लेने से पहले रोगियों की एचएलए आनुवंशिक जांच से प्रतिकूल प्रतिक्रियाओं को प्रभावी ढंग से रोका जा सकता है। मानक स्क्रीनिंग परिणामों की विश्वसनीयता सुनिश्चित करते हैं।

4. संक्रामक रोगों के प्रति संवेदनशीलता/प्रतिरोध:

कुछ एचएलए प्रकार वायरस (जैसे एचआईवी, एचपीवी, एचसीवी और एचबीवी) के प्रति प्रतिरक्षा प्रतिक्रियाओं को प्रभावित करते हैं, यह निर्धारित करते हैं कि कोई व्यक्ति अतिसंवेदनशील है या वायरस को प्रभावी ढंग से साफ़ करने में सक्षम है।

अनुप्रयोग परिदृश्य

1.एचएलए टाइपिंग प्रयोगशालाओं में नियमित गुणवत्ता नियंत्रण: नैदानिक ​​​​एचएलए टाइपिंग सेवाएं प्रदान करने वाली कोई भी प्रयोगशाला (आमतौर पर एक प्रमुख अस्पताल के रक्त आधान विभाग/प्रत्यारोपण केंद्र या तीसरे पक्ष की प्रयोगशाला से संबद्ध) को नियमित इन-हाउस गुणवत्ता नियंत्रण उत्पादों के रूप में मानकों का उपयोग करना चाहिए।

2. बाहरी गुणवत्ता मूल्यांकन (प्रवीणता परीक्षण): राष्ट्रीय या अंतर्राष्ट्रीय आधिकारिक संगठनों (जैसे कि चाइना बोन मैरो बैंक, एएसएचआई और ईएफआई) द्वारा आयोजित, ब्लाइंड नमूने (अनिवार्य रूप से मानक) उनकी टाइपिंग क्षमताओं का आकलन करने के लिए प्रयोगशालाओं में वितरित किए जाते हैं। केवल मूल्यांकन में उत्तीर्ण प्रयोगशालाएँ ही नैदानिक ​​रिपोर्ट जारी करने के लिए योग्य हैं।

3. किट और निर्माता: आईवीडी (इन विट्रो डायग्नोस्टिक) अभिकर्मक निर्माताओं को विकास और बड़े पैमाने पर उत्पादन के दौरान अपने एचएलए टाइपिंग किट के प्रदर्शन को सत्यापित करने के लिए मानकों का उपयोग करना चाहिए।

4. वैज्ञानिक अनुसंधान: अनुसंधान डेटा की सटीकता और विश्वसनीयता सुनिश्चित करने के लिए इम्यूनोलॉजी, आनुवंशिकी और रोग संघ विश्लेषण जैसी अनुसंधान परियोजनाओं में भी मानकों का उपयोग किया जाता है।

5. फोरेंसिक चिकित्सा और पितृत्व परीक्षण: एचएलए प्रणाली अत्यधिक बहुरूपी है और एक समय एक महत्वपूर्ण आनुवंशिक मार्कर थी। हालाँकि एसटीआर तकनीक अब अधिक सामान्यतः उपयोग की जाती है, फिर भी इसका उपयोग कुछ विशेष मामलों में किया जाता है, और सटीकता सुनिश्चित करने के लिए मानकों की भी आवश्यकता होती है।