प्राइमर और जांच

पृष्ठभूमि

    आणविक निदान प्रौद्योगिकी में, प्राइमर और जांच मुख्य हैं। प्राइमर कृत्रिम रूप से संश्लेषित ऑलिगोन्यूक्लियोटाइड अनुक्रम हैं। न्यूक्लियोटाइड पोलीमराइजेशन की शुरुआत के लिए प्रमुख मार्गदर्शक अणुओं के रूप में, उनकी लंबाई आम तौर पर 18 और 27 आधार जोड़े के बीच होती है, जो टीएम मूल्य और विशिष्टता से संबंधित है। यदि वे बहुत लंबे हैं (38 बेस जोड़े से अधिक), तो विस्तार तापमान 74 डिग्री सेल्सियस से अधिक हो जाएगा, जो टाक डीएनए पोलीमरेज़ की उपयुक्त प्रतिक्रिया तापमान सीमा से परे है, जो एंजाइम गतिविधि और डीएनए प्रतिकृति को प्रभावित करता है। 

    पीसीआर प्रक्रिया में, प्राइमर महत्वपूर्ण होते हैं और डीएनए पोलीमरेज़ को प्रतिकृति शुरू करने के लिए एक प्रारंभिक बिंदु प्रदान करते हैं। एक प्राइमर लक्ष्य क्षेत्र के एक छोर पर टेम्पलेट श्रृंखला का पूरक है, और दूसरा दूसरे छोर का पूरक है, जो पोलीमरेज़ के लिए प्रारंभिक स्थिति को दर्शाता है। पीसीआर शुरू होने के बाद और डीएनए टेम्प्लेट श्रृंखला को एक स्ट्रैंड में खोलने के लिए तापमान बढ़ जाता है, प्राइमर बेस पूरक युग्मन के सिद्धांत के अनुसार विशिष्ट क्षेत्र से जुड़ जाता है। डीएनए पोलीमरेज़ बाइंडिंग साइट को पहचानता है, प्राइमर के 3' सिरे से न्यूक्लियोटाइड जोड़ता है, और नई श्रृंखला को 5' से 3' सिरे तक फैलाता है। डीएनए अंशों के घातीय प्रवर्धन को प्राप्त करने के लिए चक्र को दोहराया जाता है। प्राइमर ऊंची इमारत के निर्माण की आधारशिला की तरह हैं, जो पीसीआर की कुशल उन्नति सुनिश्चित करते हैं। 

    जांच एक लेबल न्यूक्लिक एसिड अनुक्रम है जो विशेष रूप से लक्ष्य का सटीक पता लगाने के लिए आणविक संकरण के माध्यम से लक्ष्य न्यूक्लिक एसिड अनुक्रम से जुड़ता है। यह आणविक निदान के लिए एक महत्वपूर्ण 'हथियार' है और एक 'सिग्नल लाइट' जैसे मार्कर के साथ डीएनए या आरएनए अनुक्रम हो सकता है। जैविक नमूनों में कई न्यूक्लिक एसिड अणु होते हैं। जब कोई लेबल नहीं होता है, तो लक्ष्य न्यूक्लिक एसिड से जुड़ने वाले जांच के कमजोर सिग्नल आसानी से डूब जाते हैं। मार्कर के साथ, जांच लक्ष्य अनुक्रम से जुड़ती है और रेडियोधर्मी आइसोटोप ऑटोरैडियोग्राफी, फ्लोरोसेंट डाई ल्यूमिनेसेंस, या रासायनिक रंग विकास के माध्यम से आसानी से कैप्चर किए गए सिग्नल का उत्सर्जन कर सकती है, जिससे शोधकर्ताओं को लक्ष्य न्यूक्लिक एसिड को समझने में मदद मिलती है।

प्राइमर जांच परिचय

डीपीसीआर प्राइमर जांच डिजिटल पीसीआर लक्ष्य अनुक्रम की प्रतियों की संख्या की सटीक गणना करने की एक विधि है। पॉइसन वितरण के आधार पर, परीक्षण किए जाने वाले नमूने को कई स्वतंत्र प्रतिक्रिया ब्लॉकों (एक चिप पर माइक्रोड्रॉपलेट्स या छोटे प्रतिक्रिया कक्ष) में विभाजित किया जाता है, और प्रत्येक ब्लॉक में केवल 0 या 1 लक्ष्य अनुक्रम होता है।   अधिक>

क्यूपीसीआर प्राइमर और जांच क्यूपीसीआर किसी लक्ष्य अनुक्रम की प्रतिलिपि संख्या का मात्रात्मक रूप से पता लगाने की एक विधि है। यह मानक वक्र विधि पर आधारित है और पीसीआर प्रवर्धन के दौरान वास्तविक समय में प्रवर्धित उत्पादों की संख्या को मापता है।   अधिक>