Cebadores y sondas

Fondo

    En la tecnología de diagnóstico molecular, los cebadores y las sondas son el núcleo. Los cebadores son secuencias de oligonucleótidos sintetizadas artificialmente. Como moléculas guía clave para el inicio de la polimerización de nucleótidos, su longitud generalmente está entre 18 y 27 pares de bases, lo que está relacionado con el valor de Tm y la especificidad. Si son demasiado largos (más de 38 pares de bases), la temperatura de extensión excederá los 74 °C, lo que está más allá del rango de temperatura de reacción adecuado de la ADN polimerasa Taq, lo que afecta la actividad enzimática y la replicación del ADN. 

    En el proceso de PCR, los cebadores son cruciales y proporcionan un punto de partida para que la ADN polimerasa inicie la replicación. Un cebador es complementario a la cadena plantilla en un extremo de la región objetivo y el otro es complementario al otro extremo, lo que indica la posición inicial de la polimerasa. Después de que se inicia la PCR y la temperatura aumenta para desenrollar la cadena molde de ADN en una sola hebra, el cebador se une a la región específica según el principio de emparejamiento complementario de bases. La ADN polimerasa reconoce el sitio de unión, agrega nucleótidos del extremo 3' del cebador y extiende la nueva cadena desde el extremo 5' al 3'. El ciclo se repite para lograr una amplificación exponencial de los fragmentos de ADN. Los cebadores son como la piedra angular de la construcción de un edificio de gran altura, lo que garantiza el avance eficiente de la PCR. 

    La sonda es una secuencia de ácido nucleico marcada que se une específicamente a la secuencia de ácido nucleico diana mediante hibridación molecular para detectar con precisión la diana. Es un 'arma' clave para el diagnóstico molecular y puede ser una secuencia de ADN o ARN con un marcador como una 'señal luminosa'. Hay muchas moléculas de ácido nucleico en muestras biológicas. Cuando no hay etiqueta, la señal débil de la sonda que se une al ácido nucleico objetivo se sumerge fácilmente. Con el marcador, la sonda se une a la secuencia objetivo y puede emitir una señal fácilmente capturada mediante autorradiografía de isótopos radiactivos, luminiscencia de tinte fluorescente o desarrollo químico de color, lo que ayuda a los investigadores a comprender el ácido nucleico objetivo.

Introducción a la sonda cebadora

sonda cebadora dPCR La PCR digital es un método para contar con precisión el número de copias de una secuencia objetivo. Según la distribución de Poisson, la muestra que se va a analizar se divide en muchos bloques de reacción independientes (microgotas o pequeñas cámaras de reacción en un chip) y solo hay 0 o 1 secuencia objetivo en cada bloque.   Más>

Cebadores y sondas qPCR qPCR es un método para detectar cuantitativamente el número de copias de una secuencia objetivo. Se basa en el método de la curva estándar y mide la cantidad de productos amplificados en tiempo real durante la amplificación por PCR.   Más>