Servicio de detección Lenti-ISA

Principio de funcionamiento

Actualmente, el método estándar de oro de la industria se basa principalmente en la combinación de amplificación por PCR y secuenciación de próxima generación (NGS). Sus principios básicos son los siguientes:

1. Anclar lo conocido, explorar lo desconocido : todos los diseños se basan en un hecho fundamental: las repeticiones terminales largas (LTR) en ambos extremos del vector viral son conocidas, mientras que las secuencias del genoma del huésped que las flanquean son desconocidas. La tecnología de detección es como un explorador armado con un mapa de los LTR virales, que busca el 'continente desconocido' (ADN huésped) adyacente a ellos.

2. Paso clave: PCR mediada por enlazador (LM-PCR) :

Fragmentación: el ADN genómico intacto se fragmenta aleatoriamente en pequeños fragmentos adecuados para la secuenciación. Ligadura de enlazadores: se une un enlazador con una secuencia conocida a los extremos de todos los fragmentos de ADN. Este enlazador actúa como un 'identificador' universal.

PCR anidada: se realizan dos rondas de amplificación por PCR precisa.

*PCR de primera ronda: un cebador se une al final de la LTR viral y otro cebador se une al conector. Sólo los fragmentos con una LTR viral en un extremo y un enlazador en el otro se amplifican exponencialmente, enriqueciendo de manera eficiente la información en miles de sitios de integración.

*PCR de segunda ronda (anidada): se realiza una segunda amplificación dentro del primer producto de PCR utilizando otro par de cebadores, lo que mejora aún más la especificidad y el rendimiento y prepara para la introducción de adaptadores de secuenciación NGS.

3. Secuenciación de alto rendimiento y análisis bioinformático : 

Los productos de PCR se secuencian mediante NGS, generando millones de lecturas de secuencia. Utilizando canales bioinformáticos especializados, estas lecturas se alinean con el genoma humano de referencia para localizar con precisión el cromosoma, las coordenadas y los genes vecinos de cada evento de integración. Luego se calcula la frecuencia de cada sitio de integración para evaluar la clonalidad.

Flujo de trabajo estándar

Un servicio completo de Análisis del sitio de integración  normalmente incluye los siguientes pasos:

Escenarios de aplicación

Este servicio es ampliamente utilizado en las siguientes áreas:

Flujo de trabajo estándar

Elegir servicios de pruebas profesionales puede aportar múltiples beneficios a los investigadores:

En resumen, los servicios de análisis del sitio de integración lentiviral  sirven como un puente fundamental que conecta la I+D de terapia génica básica con la aplicación clínica. A través de una 'navegación genómica' precisa, revela el comportamiento de los lentivirus dentro de las células, proporcionando datos sólidos que respaldan la seguridad terapéutica y avanzando significativamente nuestra comprensión de la biología de los vectores virales y la dinámica celular. Con el advenimiento de la era de la medicina de precisión, la importancia de este servicio será cada vez más destacada.