del sitio de integración AAVde análisis  Servicio

El virus adenoasociado (AAV), uno de los vectores más populares en terapia génica, es conocido por su baja patogenicidad, expresión a largo plazo y perfil de seguridad favorable. Sin embargo, al entrar en las células huésped, el genoma del vector AAV tiene el potencial de integrarse aleatoriamente en los cromosomas del huésped. Si bien esta incidencia es mucho menor que con otros vectores retrovirales, este evento de integración conlleva riesgos potenciales, como la mutagénesis por inserción que activa oncogenes o la inactivación de genes supresores de tumores. Por lo tanto, la detección precisa de los sitios de integración de AAV es crucial para evaluar la seguridad a largo plazo de los productos de terapia génica, optimizar el diseño de vectores y avanzar en la investigación clínica.

El análisis del sitio de integración de AAV es un servicio técnico que utiliza secuenciación de alto rendimiento (NGS) y análisis bioinformático para identificar de manera integral y precisa la ubicación y la frecuencia de inserción del genoma del vector AAV dentro del cromosoma de la célula huésped, así como su contexto genómico circundante. Su objetivo principal es evaluar el potencial de integración y los posibles riesgos de genotoxicidad de los vectores AAV en productos de terapia génica, proporcionando datos de seguridad críticos para ensayos clínicos y preclínicos.

Los vectores de AAV existen principalmente dentro de las células como episomas circulares (episomas), pero una pequeña porción se integra en los cromosomas a través de mecanismos de reparación del ADN de la célula huésped (como la unión de extremos no homólogos (NHEJ) o la unión de extremos mediada por microhomología (MMEJ).

Actualmente, la tecnología de detección principal se basa en la secuenciación de próxima generación (NGS). Sus principios básicos son:
1. Puente y enriquecimiento: utilización de la estructura única en la unión del genoma del huésped y el vector de AAV secuencias para enriquecimiento Los métodos más comunes son la PCR mediada por ligación (LM-PCR) o la PCR mediada por amplificación lineal (LAM-PCR). Estos métodos utilizan cebadores específicos para amplificar selectivamente fragmentos que contienen solo la unión 'huésped-ADN-vector de AAV-ADN', enriqueciendo significativamente la información del sitio de integración y eliminando la interferencia de grandes cantidades de ADN genómico y episomal de fondo.

Un servicio completo de análisis del sitio de integración de AAV normalmente incluye los siguientes pasos:

La tecnología basada en LM-PCR/NGS puede detectar eventos de integración raros con frecuencias inferiores al 0,0001 %, superando con creces el límite de detección de los métodos tradicionales.

Los sitios de integración se pueden descubrir en todo el genoma, eliminando la necesidad de asumir de forma preventiva los puntos críticos de integración.

Los formatos de datos e informes proporcionados cumplen con las pautas de la FDA y otras agencias reguladoras para la evaluación de seguridad de productos de terapia génica, lo que brinda respaldo de datos sólidos para las presentaciones de IND.

Nuestro experimentado equipo maneja complejos procesos experimentales y de análisis de datos, lo que ahorra significativamente tiempo y esfuerzo al personal de I+D y acelera el proceso de desarrollo.

No solo proporcionamos una lista de sitios de integración, sino que también brindamos una interpretación profunda basada en la biología genómica, brindando a los clientes información útil.