golpe de efecto

La activación genética se refiere a la inserción de un nuevo gen o secuencia de ADN en una ubicación específica del genoma. Esto se puede lograr mediante recombinación homóloga, vectores virales o CRISPR/Cas9. La activación de genes homólogos mediada por recombinación requiere la introducción de un fragmento de ADN modificado que contiene la secuencia genética deseada en el sitio objetivo; se pueden utilizar vectores virales, como retrovirus o virus adenoasociados (AAV), para introducir nuevos genes en el genoma; CRISPR/Cas9 también se puede utilizar para insertar un gen utilizando una plantilla de ADN de un donante junto con sgRNA y la enzima Cas9.

Guiada por un ARN guía único (sgRNA), la endonucleasa Cas9 induce una rotura de doble hebra (DSB) en un locus genómico específico. Luego, la célula activa la vía de reparación mediada por recombinación homóloga. En presencia de una plantilla de ADN donante altamente homóloga, la secuencia donante se utiliza para reparar la rotura, lo que permite la inserción precisa del fragmento de ADN objetivo en el genoma en la ubicación deseada.

Transfección celular : el vector knock-in diseñado se introduce en las células diana mediante métodos como la transfección química, la electroporación o la transducción viral. La optimización de las condiciones de entrega es fundamental para mejorar la eficiencia de activación y mantener la viabilidad celular.