नॉक में

जीन नॉक-इन से तात्पर्य जीनोम में एक विशिष्ट स्थान पर एक नए जीन या डीएनए अनुक्रम के सम्मिलन से है। इसे सजातीय पुनर्संयोजन, वायरल वैक्टर, या CRISPR/Cas9 के माध्यम से प्राप्त किया जा सकता है। समजात पुनर्संयोजन-मध्यस्थता जीन नॉक-इन के लिए लक्ष्य स्थल में वांछित जीन अनुक्रम वाले एक संशोधित डीएनए टुकड़े की शुरूआत की आवश्यकता होती है; वायरल वैक्टर, जैसे रेट्रोवायरस या एडेनो-एसोसिएटेड वायरस (एएवी), का उपयोग जीनोम में नए जीन पहुंचाने के लिए किया जा सकता है; CRISPR/Cas9 का उपयोग sgRNA और Cas9 एंजाइम के साथ डोनर डीएनए टेम्पलेट का उपयोग करके जीन डालने के लिए भी किया जा सकता है।

एकल-गाइड आरएनए (एसजीआरएनए) द्वारा निर्देशित, कैस9 एंडोन्यूक्लिज़ एक विशिष्ट जीनोमिक स्थान पर डबल-स्ट्रैंड ब्रेक (डीएसबी) प्रेरित करता है। कोशिका तब समजात पुनर्संयोजन-मध्यस्थता मरम्मत मार्ग को सक्रिय करती है। अत्यधिक समरूप दाता डीएनए टेम्पलेट की उपस्थिति में, दाता अनुक्रम का उपयोग ब्रेक की मरम्मत के लिए किया जाता है, जिससे वांछित स्थान पर जीनोम में लक्ष्य डीएनए टुकड़े का सटीक सम्मिलन सक्षम हो जाता है।

सेल ट्रांसफ़ेक्शन : इंजीनियर्ड नॉक-इन वेक्टर को रासायनिक ट्रांसफ़ेक्शन, इलेक्ट्रोपोरेशन, या वायरल ट्रांसडक्शन जैसी विधियों का उपयोग करके लक्ष्य कोशिकाओं में पेश किया जाता है। नॉक-इन दक्षता में सुधार और सेल व्यवहार्यता बनाए रखने के लिए डिलीवरी स्थितियों का अनुकूलन महत्वपूर्ण है।