आरटी-पीसीआर अनिवार्य रूप से एक दो चरण वाली एंजाइमैटिक प्रतिक्रिया प्रक्रिया है जिसे सूक्ष्म मात्रा में मौजूद विशिष्ट आरएनए अनुक्रमों के गुणात्मक या मात्रात्मक विश्लेषण के लिए डिज़ाइन किया गया है।
रिवर्स ट्रांसक्रिप्शन (आरटी)
'आरएनए की भाषा' का 'डीएनए की भाषा' में अनुवाद करना
रिवर्स ट्रांसक्रिप्शन चरण रिवर्स ट्रांसक्रिपटेस का उपयोग करता है, जो टेम्पलेट के रूप में कुल आरएनए नमूने का उपयोग करता है। एमआरएनए की पॉलीए पूंछ को जोड़ने के लिए विशिष्ट प्राइमरों (ओलिगो (डीटी) प्राइमरों, या व्यापक कैप्चर के लिए यादृच्छिक हेक्सामर्स) द्वारा निर्देशित, यह एक पूरक डीएनए स्ट्रैंड के संश्लेषण को उत्प्रेरित करता है, जिसे पूरक डीएनए (सीडीएनए) के रूप में जाना जाता है।
मात्रात्मक वास्तविक समय पीसीआर (क्यूपीसीआर)
'डीएनए निर्देशों' का घातीय प्रवर्धन और वास्तविक समय की निगरानी
पहले चरण में संश्लेषित सीडीएनए को एक टेम्पलेट के रूप में उपयोग किया जाता है। चक्रीय पीसीआर प्रवर्धन करने के लिए विशिष्ट प्राइमर, एक डीएनए पोलीमरेज़ (उदाहरण के लिए, थर्मोस्टेबल टैक पोलीमरेज़), और एक फ्लोरोसेंट रिपोर्टिंग सिस्टम (नीचे वर्णित) जोड़ा जाता है। प्रत्येक चक्र में शामिल हैं: विकृतीकरण, एनीलिंग और एक्सटेंशन।