लेंटी-आईएसए डिटेक्शन सर्विस

काम के सिद्धांत

वर्तमान में, उद्योग की स्वर्ण मानक पद्धति मुख्य रूप से पीसीआर प्रवर्धन और अगली पीढ़ी के अनुक्रमण (एनजीएस) के संयोजन पर निर्भर करती है। इसके मूल सिद्धांत इस प्रकार हैं:

1. ज्ञात को स्थापित करना, अज्ञात की खोज करना : सभी डिज़ाइन एक मौलिक तथ्य पर आधारित हैं: वायरल वेक्टर के दोनों सिरों पर लंबे टर्मिनल रिपीट (एलटीआर) ज्ञात हैं, जबकि उनके किनारे स्थित मेजबान जीनोम अनुक्रम अज्ञात हैं। डिटेक्शन तकनीक वायरल एलटीआर के मानचित्र से लैस एक खोजकर्ता की तरह है, जो उनके निकट 'अज्ञात महाद्वीप' (मेजबान डीएनए) की खोज कर रहा है।

 

2. मुख्य चरण - लिंकर-मध्यस्थता पीसीआर (एलएम-पीसीआर) :

विखंडन: बरकरार जीनोमिक डीएनए को अनुक्रमण के लिए उपयुक्त छोटे टुकड़ों में यादृच्छिक रूप से खंडित किया जाता है। लिंकर बंधाव: ज्ञात अनुक्रम वाला एक लिंकर सभी डीएनए टुकड़ों के सिरों से जुड़ा होता है। यह लिंकर एक सार्वभौमिक 'हैंडल' के रूप में कार्य करता है।

 

नेस्टेड पीसीआर: सटीक पीसीआर प्रवर्धन के दो दौर किए जाते हैं।

*पहला राउंड पीसीआर: एक प्राइमर वायरल एलटीआर के अंत से जुड़ता है, और दूसरा प्राइमर लिंकर से जुड़ता है। केवल एक छोर पर वायरल एलटीआर और दूसरे पर एक लिंकर वाले टुकड़े तेजी से प्रवर्धित होते हैं, जो हजारों एकीकरण साइटों पर जानकारी के लिए कुशलतापूर्वक समृद्ध होते हैं।

 

*दूसरा दौर (नेस्टेड) ​​पीसीआर: प्राइमरों की एक और जोड़ी का उपयोग करके पहले पीसीआर उत्पाद के भीतर दूसरा प्रवर्धन किया जाता है, जिससे विशिष्टता और उपज में और सुधार होता है और एनजीएस अनुक्रमण एडेप्टर की शुरूआत की तैयारी होती है।

 

3. उच्च-थ्रूपुट अनुक्रमण और जैव सूचना विज्ञान विश्लेषण : 

पीसीआर उत्पादों को एनजीएस का उपयोग करके अनुक्रमित किया जाता है, जिससे लाखों अनुक्रम रीड उत्पन्न होते हैं। विशेष जैव सूचना विज्ञान पाइपलाइनों का उपयोग करते हुए, इन रीडिंग को प्रत्येक एकीकरण घटना के गुणसूत्र, निर्देशांक और पड़ोसी जीन का सटीक पता लगाने के लिए मानव संदर्भ जीनोम से जोड़ा जाता है। क्लोनलिटी का आकलन करने के लिए प्रत्येक एकीकरण साइट की आवृत्ति की गणना की जाती है।

 

मानक वर्कफ़्लो

एक संपूर्ण एकीकरण साइट विश्लेषण  सेवा में आम तौर पर निम्नलिखित चरण शामिल होते हैं:

अनुप्रयोग परिदृश्य

यह सेवा निम्नलिखित क्षेत्रों में व्यापक रूप से उपयोग की जाती है:

मानक वर्कफ़्लो

पेशेवर परीक्षण सेवाएँ चुनने से शोधकर्ताओं को कई लाभ मिल सकते हैं:

संक्षेप में, लेंटिवायरल इंटीग्रेशन साइट विश्लेषण  सेवाएं बुनियादी जीन थेरेपी आर एंड डी को नैदानिक ​​​​अनुप्रयोग के साथ जोड़ने वाले एक महत्वपूर्ण पुल के रूप में कार्य करती हैं। सटीक 'जीनोमिक नेविगेशन' के माध्यम से, यह कोशिकाओं के भीतर लेंटिवायरस के व्यवहार को प्रकट करता है, चिकित्सीय सुरक्षा के लिए ठोस डेटा समर्थन प्रदान करता है और वायरल वेक्टर जीव विज्ञान और सेलुलर गतिशीलता की हमारी समझ को महत्वपूर्ण रूप से आगे बढ़ाता है। सटीक चिकित्सा के युग के आगमन के साथ, इस सेवा का महत्व तेजी से प्रमुख हो जाएगा।

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