सामान्य प्लास्मिड अभिकर्मक में एक विशिष्ट, साइट-विशिष्ट एकीकरण तंत्र का अभाव होता है। इसलिए, जब प्लास्मिड को कोशिका नाभिक में पहुंचाया जाता है, तो एकीकरण यादृच्छिक रूप से होता है, और प्लास्मिड का केवल एक छोटा सा हिस्सा सेलुलर प्रतिकृति के दौरान डीएनए ब्रेक द्वारा मरम्मत किया जाता है और मेजबान क्रोमोसोमल जीनोम में एकीकृत किया जाता है।
इस प्रकार, हम कई प्रमुख विशेषताओं का सारांश प्रस्तुत करते हैं:
1. यादृच्छिक एकीकरण से एकीकरण दक्षता कम हो जाती है, और सक्रिय ट्रांसक्रिप्शनल क्षेत्रों में एकीकरण हमेशा संभव नहीं होता है;
2. एकीकृत प्लास्मिड की एक बड़ी मात्रा (उदाहरण के लिए, एक PCDNA3.1 वेक्टर प्लस 3000bp लक्ष्य जीन के लिए 5 μg के 1x10e6 ट्रांसफ़ेक्शन का उपयोग करना,
लगभग 5.37*10e11 (कोशिकाओं के विभाजित होने पर प्रतियों की संख्या धीरे-धीरे कम या कम हो जाती है।)
3. क्षणिक अभिव्यक्ति का चरम आमतौर पर 24-96 घंटों के भीतर होता है।
4. सकारात्मक कोशिकाओं को प्राप्त करने के लिए एकीकृत प्रतियों को एंटीबायोटिक स्क्रीनिंग से गुजरना होगा, और बाद में प्रतिरोध बनाए रखना होगा।
5. क्योंकि एकीकरण डीएनए ब्रेक मरम्मत और पुनर्संयोजन के माध्यम से होता है, बाद में उसी साइट पर और ब्रेक की संभावना होती है,
संभावित रूप से लक्ष्य जीन को बाधित करना। इसलिए, स्थिरता एक चुनौती है. एक मोनोक्लोनल स्थिर सेल लाइन स्थापित करने और मार्ग के माध्यम से इसकी स्थिरता का विश्लेषण करने की सिफारिश की जाती है।
6. रैखिक डीएनए वृत्ताकार डीएनए की तुलना में अधिक कुशलता से एकीकृत होता है, लेकिन वृत्ताकार डीएनए की तुलना में इसे वितरित करना अधिक कठिन होता है।
7. विभिन्न कोशिका प्रकार काफी भिन्न होते हैं, जो वितरण और एकीकरण दोनों में प्रकट होते हैं।
8. डिलीवरी रसायन कुछ हद तक जहरीले होते हैं, और डिलीवरी दक्षता और विषाक्तता के बीच संतुलन बनाए रखना चाहिए।
9. वितरित प्लास्मिड एंडोटॉक्सिन से मुक्त होना चाहिए, क्योंकि एंडोटॉक्सिन एक प्रतिरक्षा प्रतिक्रिया को ट्रिगर कर सकता है।
