La transfection plasmidique commune ne dispose pas d’un mécanisme d’intégration spécifique au site. Par conséquent, lorsque le plasmide est délivré dans le noyau cellulaire, l'intégration se produit de manière aléatoire et seule une petite partie du plasmide est réparée par des cassures de l'ADN lors de la réplication cellulaire et intégrée dans le génome chromosomique de l'hôte.
Ainsi, nous résumons plusieurs caractéristiques clés :
1. L’intégration aléatoire conduit à une faible efficacité d’intégration et l’intégration dans des régions transcriptionnelles actives n’est pas toujours possible ;
2. Une grande quantité de plasmide non intégré (par exemple, en utilisant une transfection 1x10e6 de 5 µg, pour un vecteur pcDNA3.1 plus un gène cible de 3000 pb,
environ 5,37*10e11 (le nombre de copies est progressivement dilué ou dégradé à mesure que les cellules se divisent.)
3. Un pic d’expression transitoire se produit généralement dans les 24 à 96 heures.
4. Les copies intégrées doivent subir un dépistage antibiotique pour obtenir des cellules positives, et la résistance doit être maintenue plus tard.
5. Étant donné que l'intégration se produit par réparation et recombinaison des cassures de l'ADN, il existe une possibilité de cassures supplémentaires sur le même site ultérieurement.
potentiellement perturber le gène cible. La stabilité constitue donc un défi. Il est recommandé d’établir une lignée cellulaire monoclonale stable et d’analyser sa stabilité par passage.
6. L’ADN linéaire s’intègre plus efficacement que l’ADN circulaire, mais il est plus difficile à mettre en œuvre que l’ADN circulaire.
7. Les différents types de cellules varient considérablement, se manifestant à la fois par leur délivrance et leur intégration.
8. Les produits chimiques de livraison sont quelque peu toxiques et un équilibre doit être trouvé entre l'efficacité de la livraison et la toxicité.
9. Le plasmide délivré doit être exempt d'endotoxines, car celles-ci peuvent déclencher une réponse immunitaire.
