Amorces et sondes

Arrière-plan

    Dans la technologie du diagnostic moléculaire, les amorces et les sondes constituent le noyau. Les amorces sont des séquences d'oligonucléotides synthétisées artificiellement. En tant que molécules directrices clés pour l’initiation de la polymérisation des nucléotides, leur longueur est généralement comprise entre 18 et 27 paires de bases, ce qui est lié à la valeur et à la spécificité de Tm. S'ils sont trop longs (supérieurs à 38 paires de bases), la température d'extension dépassera 74°C, ce qui est au-delà de la plage de température de réaction appropriée de l'ADN polymérase Taq, affectant l'activité enzymatique et la réplication de l'ADN. 

    Dans le processus PCR, les amorces sont cruciales et fournissent un point de départ à l’ADN polymérase pour initier la réplication. Une amorce est complémentaire de la chaîne matrice à une extrémité de la région cible, et l'autre est complémentaire à l'autre extrémité, indiquant la position de départ de la polymérase. Une fois la PCR lancée et la température élevée pour dérouler la chaîne matrice d'ADN en un seul brin, l'amorce se lie à la région spécifique selon le principe de l'appariement complémentaire des bases. L'ADN polymérase reconnaît le site de liaison, ajoute des nucléotides de l'extrémité 3' de l'amorce et étend la nouvelle chaîne de l'extrémité 5' à l'extrémité 3'. Le cycle est répété pour obtenir une amplification exponentielle des fragments d'ADN. Les amorces sont comme la pierre angulaire de la construction d’un immeuble de grande hauteur, garantissant l’avancement efficace du PCR. 

    La sonde est une séquence d'acide nucléique marquée qui se lie spécifiquement à la séquence d'acide nucléique cible par hybridation moléculaire pour détecter avec précision la cible. Il s'agit d'une « arme » clé pour le diagnostic moléculaire et peut être une séquence d'ADN ou d'ARN avec un marqueur comme un « signal lumineux ». Il existe de nombreuses molécules d’acide nucléique dans les échantillons biologiques. Lorsqu’il n’y a pas de marqueur, le signal faible de la sonde se liant à l’acide nucléique cible est facilement submergé. Avec le marqueur, la sonde se lie à la séquence cible et peut émettre un signal facilement capturé par autoradiographie isotopique radioactive, luminescence par colorant fluorescent ou développement chimique de couleur, aidant ainsi les chercheurs à comprendre l'acide nucléique cible.

Introduction à la sonde d'amorce

Sonde d'amorce dPCR La PCR numérique est une méthode permettant de compter avec précision le nombre de copies d'une séquence cible. Sur la base de la distribution de Poisson, l'échantillon à tester est divisé en plusieurs blocs de réaction indépendants (microgouttelettes ou minuscules chambres de réaction sur une puce), et il n'y a que 0 ou 1 séquence cible dans chaque bloc.   Plus>

Amorces et sondes qPCR La qPCR est une méthode permettant de détecter quantitativement le nombre de copies d'une séquence cible. Elle s'appuie sur la méthode de la courbe étalon et mesure en temps réel le nombre de produits amplifiés lors de l'amplification PCR.   Plus>