Étalon de référence à locus HLA unique

Arrière-plan

Les molécules d'antigène leucocytaire humain (HLA) sont situées sur le bras court du chromosome 6 de l'homme. Il s'agit d'une région polymorphe d'environ 3,6 M impliquée dans la réponse immunitaire, contenant plus de 200 gènes. À l’exception des vrais jumeaux, il est presque impossible de trouver des personnes possédant le même HLA. Le HLA de chacun varie considérablement, ce qui en fait le système génétique le plus complexe découvert jusqu'à présent. Actuellement, la base de données IPD-IMGT/HLA comprend 38 008 allèles (version 3.55, 2024-01).

Qu’est-ce qu’une norme de génotypage à locus HLA unique ?

Une norme de génotypage de locus HLA unique fait référence à un échantillon biologique (généralement de l'ADN ou une lignée cellulaire) dont la séquence génomique pour un locus HLA spécifique (tel que HLA-B) a été identifiée et reconnue avec précision par des institutions internationalement reconnues utilisant des méthodes de référence (telles que le séquençage).

Caractéristiques principales :

Locus-Specific : Responsable de la saisie des résultats à un locus HLA spécifique.

Connu et sans ambiguïté : le génotype est certain à 100 % et représente généralement le type le plus courant ou le plus représentatif à ce locus.

Haute précision : les résultats de typage ont été validés à plusieurs reprises sur plusieurs plates-formes et laboratoires et sont considérés comme la « vérité » ou « l'étalon-or » pour ce type.

Le système HLA se compose de trois régions

La région de classe I correspond à des gènes tels que HLA-A, -B et -C et code pour la chaîne alpha des molécules de classe I. La microglobuline bêta 2 des molécules de classe I est codée par des gènes situés dans des régions non HLA. Il contient également des HLA-E, -F et -G non classiques.

La région de classe II correspond à des gènes tels que HLA-DR, -DQ et -DP, et code pour le gène de la chaîne alpha (A1) et le gène de la chaîne bêta (B1). La chaîne alpha et la chaîne bêta s’associent pour former une molécule HLA fonctionnelle. La plupart des individus portent un gène DRB supplémentaire (DRB3 ou DRB4 ou DRB5), qui code pour une chaîne bêta différente pouvant s'associer à la chaîne alpha.

La région de classe III, dans laquelle les gènes codent pour les protéines du système du complément et les gènes de la famille TNF.

Importance de la détection

Le test de typage des allèles des locus HLA de classe IA, B, C et de classe II DR, DQ joue un rôle clé dans l'appariement donneur-receveur de la transplantation de cellules souches hématopoïétiques, de la greffe de moelle osseuse et d'autres transplantations de tissus et d'organes tels que le foie et les reins. Le degré de correspondance du génotype HLA entre le donneur et le receveur affecte de manière significative le taux de survie à long terme du receveur de greffe. Plus le degré d’appariement est élevé, plus le taux de survie à long terme est élevé. Le génotype HLA fait principalement référence aux cinq loci HLA-A, B, C, DRB1 et DQB1. Le génotypage HLA peut aider à établir une bibliothèque de donneurs de cellules souches hématopoïétiques et à effectuer une analyse du polymorphisme génétique de la population HLA. Ces dernières années, la China Bone Marrow Bank préconise activement l'entrée avec des scores élevés, c'est-à-dire des tests de typage haute résolution 4 bits sur cinq locus génétiques tels que HLA-A, B, C, DRB1 et DQB1, afin d'améliorer fondamentalement l'efficacité de la correspondance HLA.

Dans le même temps, les loci HLA-I de classe B, tels que le génotypage B27 et B5801, jouent également un rôle important dans la sélection personnalisée des médicaments, tels que le diagnostic auxiliaire de la spondylarthrite ankylosante et l'orientation des médicaments contre la goutte. Il a également été démontré que HLA-B*1502 est fortement associé au syndrome de Steven Johnson provoqué par la prise de carbamazépine, un médicament antiépileptique, dans la population Han.

Principales fonctionnalités

1. Le typage HLA couvre un ensemble relativement complet de 11 locus ABC DRB1/3/4/5 DPA1 DPB1 DQA1 DQB1, typage ultra haute résolution ;

2.Format d'ADN du génome entier, y compris les exons et les introns ;

3.PCR-SBT ou identification par séquençage de troisième génération, confirmation précise de la séquence de frappe ;

4. Fond de cellules humaines, meilleure simulation des échantillons cliniques et reproductibilité ;

5. Approvisionnement durable et stable, petites différences d'un lot à l'autre ;

6. certification du système ISO90001, qualité du produit de première classe.

Quelle est la fonction principale des standards de génotypage HLA à locus unique ?

*Contrôle qualité et validation : C’est la fonction la plus cruciale. Les laboratoires testent les étalons chaque fois qu'ils effectuent une expérience de typage HLA. Si les résultats des tests des étalons diffèrent des valeurs connues, cela indique une possible contamination, une défaillance du réactif ou une erreur opérationnelle dans le processus expérimental (de l'extraction de l'ADN et de l'amplification PCR au séquençage ou à l'hybridation). Les résultats ne sont pas fiables et doivent être retestés.

*Calibration et standardisation : les résultats obtenus par différents laboratoires, en utilisant différentes marques de kits et sur différentes plateformes de séquençage peuvent varier. L'utilisation d'une norme unifiée aide les laboratoires du monde entier à calibrer leurs systèmes, en garantissant que « A*02:01 rapporté par le laboratoire A » et « A*02:01 rapporté par le laboratoire B » font exactement la même chose, obtenant ainsi des résultats standardisés et comparables. Ceci est crucial pour les collaborations internationales, telles que l’appariement des banques de moelle osseuse.

*Évaluation d'une nouvelle méthode/kit de test : lors du développement d'une nouvelle technologie de typage HLA ou d'un nouveau kit commercial, la validation des performances à l'aide d'une norme connue est essentielle pour évaluer son exactitude, sa sensibilité et sa spécificité.

*Formation et évaluation du personnel : permet de former de nouveaux techniciens et d'évaluer leurs capacités de fonctionnement et d'interprétation des résultats.

À quelles maladies les normes de génotypage HLA à locus unique sont-elles associées ?

Le typage HLA lui-même est étroitement associé à diverses maladies. Par conséquent, en tant que norme d’assurance qualité, elle est également indirectement liée au diagnostic, à la recherche et au traitement de ces maladies.

1. Transplantation d’organes et de cellules souches hématopoïétiques :

C’est le domaine le plus directement pertinent. La clé du succès d’une greffe réside dans la compatibilité HLA entre le donneur et le receveur. La moindre erreur de frappe peut entraîner un rejet immunitaire grave ou une maladie du greffon contre l'hôte (GVHD), qui peut mettre la vie en danger. Par conséquent, la précision du typage HLA est la pierre angulaire du succès de la transplantation, et le rôle des normes est irremplaçable à cet égard.

2. Maladies auto-immunes :

De nombreuses maladies auto-immunes sont fortement associées à des types HLA spécifiques. Par exemple:

* La spondylarthrite ankylosante (SA) est fortement associée au HLA-B*27.

* La polyarthrite rhumatoïde (PR) est associée à des types tels que HLA-DRB1*04:01.

* Le diabète de type 1 et la maladie coeliaque sont également associés à des types HLA spécifiques. Un typage HLA précis facilite le diagnostic et la prévision des risques de ces maladies.

3. Réactions indésirables au médicament :

Certains médicaments peuvent provoquer des effets indésirables graves, voire mortels, chez les porteurs de génotypes HLA spécifiques. Par exemple:

*Des réactions cutanées sévères provoquées par l'allopurinol (un médicament antigoutte) sont associées au HLA-B*58:01.

*La carbamazépine (un médicament antiépileptique) est associée au HLA-B*15:02.

Le dépistage génétique HLA des patients avant de prendre ces médicaments peut prévenir efficacement les effets indésirables. Les normes garantissent la fiabilité des résultats de dépistage.

4. Sensibilité/résistance aux maladies infectieuses :

Certains types de HLA influencent les réponses immunitaires aux virus (tels que le VIH, le VPH, le VHC et le VHB), déterminant si un individu est susceptible ou capable d'éliminer efficacement le virus.

Scénarios d'application

1.Contrôle de qualité de routine dans les laboratoires de typage HLA : tout laboratoire fournissant des services de typage HLA clinique (généralement affilié au service de transfusion sanguine/centre de transplantation d'un grand hôpital ou à un laboratoire tiers) doit utiliser des normes comme produits de contrôle de qualité internes de routine.

2. Évaluation externe de la qualité (tests de compétence) : organisés par des organisations nationales ou internationales faisant autorité (telles que la China Bone Marrow Bank, ASHI et EFI), des échantillons aveugles (essentiellement des normes) sont distribués aux laboratoires pour évaluer leurs capacités de typage. Seuls les laboratoires qui réussissent l'évaluation sont qualifiés pour publier des rapports cliniques.

3.Kits et fabricants : les fabricants de réactifs IVD (diagnostic in vitro) doivent utiliser des normes pour vérifier les performances de leurs kits de typage HLA pendant le développement et la production de masse.

4.Recherche scientifique : les normes sont également utilisées dans des projets de recherche tels que l'immunologie, la génétique et l'analyse des associations de maladies pour garantir l'exactitude et la fiabilité des données de recherche.

5.Médecine légale et tests de paternité : Le système HLA est hautement polymorphe et était autrefois un marqueur génétique important. Bien que la technologie STR soit désormais plus couramment utilisée, elle reste utilisée dans certains cas particuliers et des normes sont également nécessaires pour garantir l’exactitude.