servicio

Servicio de pruebas de rutina WES

Definición

El exoma completo se refiere a la colección de todas las regiones codificantes de proteínas (es decir, exones) en el genoma humano. Aunque los exones sólo representan aproximadamente entre el 1% y el 2% de todo el genoma, aproximadamente el 85% de las variantes genéticas asociadas a enfermedades conocidas se producen en esta región.
 
La prueba de rutina WES, también conocida como prueba de rutina del exoma completo, utiliza tecnología de secuenciación de alto rendimiento para realizar una secuenciación paralela a gran escala de todas las regiones de exones en el genoma de un individuo. Su objetivo principal es identificar de forma rápida y precisa variantes genéticas asociadas con enfermedades genéticas, cáncer, respuesta a medicamentos y otras afecciones, proporcionando evidencia genética precisa para el diagnóstico, la prevención y el tratamiento de enfermedades.
 

Principio

La tecnología WES-Routine se basa en la combinación de 'captura de secuencia objetivo' y 'secuenciación de alto rendimiento'.

1. Captura de región objetivo: primero, las sondas (es decir, 'cebo') diseñadas para ser específicamente complementarias a las regiones de exón se hibridan con ADN genómico fragmentado. Estas sondas actúan como imanes y atraen con precisión todas las secuencias de exones. A continuación, las regiones no exónicas (intrones, regiones intergénicas, etc.) se eluyen mediante un proceso técnico, enriqueciendo y purificando el ADN del exoma.

2. Secuenciación de alto rendimiento: la biblioteca de ADN del exoma enriquecido se somete a una secuenciación paralela masiva en una plataforma de secuenciación de alto rendimiento (como Illumina NovaSeq). Esta tecnología puede generar miles de millones de lecturas de secuencias cortas en una sola ejecución, logrando una cobertura ultraprofunda y acceso de lectura a la región objetivo.

3. Análisis bioinformático: los datos de secuenciación masiva resultantes se comparan con el genoma humano de referencia para identificar variantes de base única (SNV) y pequeñas inserciones y eliminaciones (InDels). Luego, estas variantes se filtran, anotan e interpretan utilizando bases de datos y algoritmos bioinformáticos especializados, lo que en última instancia identifica variantes candidatas que pueden ser patógenas.
 

Flujo de trabajo: de la muestra al informe

Un servicio de prueba de rutina WES estándar generalmente incluye los siguientes pasos:
  • El ADN se fragmenta y se añaden adaptadores de secuenciación para construir una biblioteca de secuenciación. Luego se utiliza un panel de captura de exones para enriquecer específicamente las regiones de exones en la biblioteca.
  • La biblioteca capturada se secuencia para garantizar una profundidad de secuenciación suficiente (normalmente >100x en promedio) en la región objetivo para garantizar la precisión y sensibilidad de la detección.
  • *Análisis primario: los datos de secuenciación sin procesar se convierten en secuencias de bases.

    *Análisis Secundario: Las secuencias se alinean con el genoma de referencia para identificar variantes.

    *Análisis e interpretación avanzados: este es el paso central. Utilizando bases de datos de frecuencia de población (como gnomAD), bases de datos de patogenicidad (como ClinVar y OMIM) y software de predicción de la función de las proteínas, la gran cantidad de variantes se filtra a través de múltiples capas. En última instancia, los genetistas moleculares clínicos profesionales, combinados con el fenotipo clínico del paciente, evalúan e interpretan la patogenicidad de las variantes seleccionadas.
  • Se genera un informe de prueba clínico detallado y fácil de entender, que enumera claramente las variantes patógenas o probablemente patógenas encontradas y proporciona una explicación de su importancia clínica. Por lo general, la agencia de pruebas brindará o recomendará asesoramiento genético profesional, donde el asesor interpretará los resultados del informe con el paciente o el médico y discutirá sus implicaciones para la salud y la familia.

Proceso de envío de muestra

  • Póngase en contacto con la agencia de pruebas y comprenda los requisitos.
  • Recoja muestras de acuerdo con los requisitos del tipo de muestra.

    ① Muestra de sangre: este es el tipo de muestra más común. Por lo general, se recolectan de 2 a 5 ml de sangre venosa utilizando tubos con anticoagulante EDTA (generalmente aquellos con tapas moradas). Evite el uso de tubos anticoagulantes con heparina, ya que la heparina puede inhibir reacciones de PCR posteriores. Después de la recolección, si no se puede enviar inmediatamente, se debe refrigerar temporalmente a 4 °C (a corto plazo) o congelar a -20 °C/-80 °C (a largo plazo), pero se deben evitar la congelación y descongelación repetidas.

    ② Muestra de tejido: el tejido fresco generalmente requiere entre 50 y 200 mg (aproximadamente el tamaño de un grano de arroz). Después de la recolección, es mejor enjuagar con solución salina previamente enfriada y congelar rápidamente en nitrógeno líquido lo antes posible, luego almacenar a -80°C para su transporte.

    ③ Saliva o hisopo oral: al recolectar saliva, es importante recolectar tantas células de la mucosa oral como sea posible, generalmente >1 ml. Los hisopos orales requieren raspados múltiples y vigorosos de la cavidad bucal interna para obtener una cantidad suficiente de células. Estas muestras generalmente se pueden almacenar y transportar a temperatura ambiente o 4°C por un corto plazo.

    ④ ADNg extraído: si extrae el ADN usted mismo, la cantidad requerida suele ser de 1 μg a 2 μg o más, con una concentración de ≥50 ng/μL. El índice de pureza OD260/280 debe estar entre 1,8 y 2,0 y el ADN debe estar libre de degradación y contaminación (como residuos de proteínas o ARN). Conservar a -20°C o -80°C. Asegúrese de utilizar suficiente hielo seco durante el transporte.
  • ① Procesamiento y almacenamiento inicial de muestras

    ② Embalaje estándar: Utilice contenedores resistentes para evitar roturas durante el transporte. Las muestras criogénicas (como sangre, tejido y ADN) deben transportarse con suficiente hielo seco, asegurándose de que el hielo seco no se haya evaporado por completo en el momento de su entrega a las instalaciones de pruebas. Lo ideal es sellar los tubos de muestra con Parafilm y el embalaje exterior debe indicar claramente la información de la muestra.

    ③ Seleccione un proveedor de logística confiable y garantice la entrega urgente con seguimiento.
  • Si la inspección de calidad falla: Reemplace o vuelva a tomar muestras según sea necesario.

Ciclo de servicio

Ciclo de servicio
 
 

Ventajas

Rentabilidad

Una sola prueba cubre las regiones de exones de aproximadamente 20.000 genes, lo que reduce significativamente el costo de probar una gran cantidad de genes individualmente y da como resultado una eficiencia extremadamente alta.

Alto rendimiento diagnóstico

Especialmente adecuado para enfermedades con fenotipos complejos y heterogéneos, elimina la necesidad de preadivinar genes sospechosos, evitando así fallos en las pruebas y retrasos causados ​​por conjeturas incorrectas.

Descubrimiento de nuevos genes.

No sólo detecta variantes en genes causantes de enfermedades conocidos, sino que también tiene el potencial de descubrir genes causantes de enfermedades completamente nuevos, avanzando así en los avances médicos.

Reminabilidad de datos

Los datos generados por una única secuenciación son un archivo electrónico permanente. A medida que la investigación científica y la comprensión genética se profundizan, los datos originales pueden volver a analizarse, lo que podría descubrir nuevas pistas sobre enfermedades y evitar así la repetición de pruebas.

Integralidad

Evita posibles omisiones de diseño en paneles específicos y proporciona la detección más completa de todo el exón.

Escenarios de aplicación

WES-Routine tiene una amplia gama de aplicaciones, que incluyen principalmente:
  Diagnóstico de enfermedades raras y difíciles: para pacientes con presentaciones clínicas complejas, inespecíficas o difíciles de diagnosticar, WES es una herramienta de primera línea para identificar la causa, lo que acorta significativamente el recorrido de diagnóstico.
  Evaluación del riesgo de cáncer hereditario: la detección de mutaciones de la línea germinal asociadas con síndromes de cáncer hereditario (como el síndrome de Lynch y el síndrome de cáncer de mama y ovario hereditario) proporciona una evaluación de riesgos y opciones de intervención temprana para los pacientes y sus familias.
  Trastornos neuropsiquiátricos: se utiliza para investigar las causas de afecciones como el trastorno del espectro autista, la discapacidad intelectual, la epilepsia y la neuropatía periférica hereditaria.
  Enfermedad cardiovascular: identificación de genes causantes de miocardiopatías hereditarias, arritmias e hipercolesterolemia familiar.
  Farmacogenómica: Análisis de variantes genéticas implicadas en el metabolismo, transporte y dianas de los fármacos para guiar la selección clínica de fármacos y el ajuste de dosis, logrando una medicación personalizada.
  Investigación científica: estudios de cohortes a gran escala, exploración de mecanismos moleculares de enfermedades y descubrimiento de nuevos genes patógenos.
El servicio de secuenciación del exoma completo WES-Routine, con su amplitud, eficiencia y asequibilidad, se ha convertido en un componente indispensable de la medicina de precisión moderna. Como un 'detective genómico' altamente eficaz, penetra el código mismo de la vida, proporcionando una poderosa herramienta científica para resolver los misterios de las enfermedades y salvaguardar la salud individual. Con el avance continuo de la tecnología de secuenciación y la creciente solidez de sus capacidades de interpretación, la rutina WES sin duda desempeñará un papel aún más crucial en la prevención, el diagnóstico y el tratamiento de enfermedades futuras.
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Correo electrónico: ventas@cb-gene.com
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