Expansión de los estándares del sitio de inserción de integración lentiviral

Los vectores lentivirales (LV) son modificaciones del virus de la inmunodeficiencia humana (VIH-1). Pueden entregar grandes cantidades de información genética a las células huésped e integrarse en el genoma celular, lo que permite una expresión estable durante generaciones. Además, como se han eliminado sus genes de virulencia, pueden utilizarse como virus pseudotipados en el laboratorio con relativa seguridad. Los vectores lentivirales pueden transfectar una variedad de tipos de células, incluidas células difíciles de transfectar, como las células primarias.

Aplicación de lentivirus en la terapia con células CAR-T

El virus lentiviral es actualmente el método de transducción principal para CAR-T (aproximadamente el 90% de los productos CAR-T aprobados por la FDA utilizan LV). La integración lentiviral en las células es semialeatoria (prefiriendo regiones transcripcionalmente activas).

1. Los lentivirus reconocen los receptores de la superficie del huésped y transportan ARN y proteínas al interior de las células;

2. El ARN viral se transcribe de forma inversa para formar ADNc bicatenario lineal (que contiene secuencias LTR en ambos extremos).

3.Integrase reconoce LTR y el ADNc se integra en el genoma del huésped;

4. El gen exógeno continúa expresándose a medida que la célula huésped se divide.

El análisis del sitio de integración (ISA) es un paso crítico en el desarrollo clínico y el seguimiento poscomercialización de productos de terapia génica (como CAR-T). Los requisitos reglamentarios los establecen las agencias reguladoras nacionales (p. ej., la FDA y la EMA) y tienen como objetivo evaluar los riesgos potenciales de la integración genómica (p. ej., mutagénesis por inserción y expansión clonal).

Los métodos de detección de ISA actuales incluyen LM-PCR, NGS y secuenciación unicelular. Para garantizar la precisión, CobiBio ha desarrollado una serie de estándares de sitios de integración lentivirales para uso de las instituciones de pruebas, que sirven como punto de referencia de calidad para evaluar las capacidades de detección. En el artículo anterior, 'Están llegando los estándares para sitios de integración lentiviral', proporcionamos descripciones de productos y presentaciones de datos para sitios de inserción múltiple monoclonales, sitios de inserción únicos monoclonales y sitios de inserción de cromosomas sexuales. CB-Gene lanzó recientemente un estándar de referencia de sitio de integración múltiple policlonal lentiviral con una frecuencia de integración del 5% al ​​2%. Este estándar de referencia, derivado de una mezcla de múltiples productos de sitios de integración monoclonales, cubre 20 sitios de inserción de 20 genes en 11 cromosomas diferentes, como se muestra en la siguiente tabla.

Figura 1. Distribución genética

Figura 2. Distribución cromosómica