Norme FFPE à double contrôle positif/négatif TF | CBPN0079

Ⅰ.Présentation du produit

Le TF (Tissue Factor) , également connu sous le nom de Coagulation Factor III ou CD142 , est codé par le gène F3 situé sur le chromosome 1 humain. Le gène F3 mesure environ 12,4 kb de longueur et code pour une protéine de 295 acides aminés constituée de trois régions structurelles majeures : un domaine extracellulaire, un domaine transmembranaire et un domaine cytoplasmique.

Physiologiquement, TF sert d'initiateur clé de la voie de coagulation extrinsèque . Après une lésion vasculaire ou tissulaire, le TF se lie au facteur de coagulation VII activé (FVIIa) pour former le complexe TF – FVIIa, initiant ainsi la cascade de coagulation et favorisant la formation de fibrine pour l'hémostase.

Dans la recherche en oncologie, le TF est exprimé de manière aberrante dans diverses tumeurs solides, notamment les cancers du col de l'utérus, du sein, du poumon, de la prostate et de l'ovaire , et a été associé à une invasion tumorale, à des métastases et à de mauvais résultats cliniques. Le TF est également apparu comme une cible conjuguée anticorps-médicament (ADC) de plus en plus étudiée.

Le développement d’ADC ciblés sur le TF est relativement récent. Suite à l'approbation du Tivdak (tisotumab vedotin) et au développement clinique du MRG004A , le TF a attiré une attention croissante de la part des sociétés pharmaceutiques et des instituts de recherche en tant que cible thérapeutique potentielle pour les tumeurs solides avancées.

L'immunohistochimie (IHC) est une méthode clé pour évaluer l'expression de la protéine TF dans des échantillons de tissus. Cependant, les résultats de l’IHC peuvent être affectés de manière significative par les performances des anticorps, les conditions de récupération de l’antigène, les paramètres de coloration et le flux de travail global du test.

La norme FFPE à double contrôle TF positif/négatif, CBPN0079 , combine des régions tissulaires TF positives et TF négatives dans un seul bloc de paraffine. Il est spécialement conçu pour la validation des anticorps TF-IHC, le contrôle qualité des tests et l'optimisation des conditions de coloration..

En incorporant des contrôles positifs et négatifs dans le même bloc FFPE, le CBPN0079 permet une évaluation simultanée de la sensibilité et de la spécificité du test tout en minimisant la variabilité expérimentale. Le produit convient à la recherche sur les cibles TF, au développement d'anticorps, au développement de tests IHC et à la validation méthodologique dans la recherche sur les ADC ciblés sur le TF et le développement de diagnostics compagnons..

Ⅱ.Spécifications du produit

Paramètre	Spécification	Description
Numéro de produit.	CBPN0079	Identifiant unique du produit. Veuillez fournir ce numéro de produit lorsque vous demandez le COA correspondant ou l'assistance technique.
Format du produit	Bloc de paraffine FFPE	Bloc de tissu fixé au formol et inclus en paraffine (FFPE), un format d'échantillon standard largement utilisé dans les applications de pathologie et d'IHC.
Épaisseur du bloc	4 mm	L'épaisseur du bloc de paraffine lui-même est de 4 mm. Pour l'IHC, le bloc doit être sectionné en coupes de tissu standard de 3 à 5 μm . Le contenu cellulaire peut varier entre les échantillons individuels et les lots sans affecter la fonction de contrôle prévue.
Anticorps validé	mAb de lapin recombinant de facteur tissulaire (S-893-34); Staidt, chat. N° S0B0577	Le standard FFPE a été validé par IHC en utilisant cet anticorps. L’anticorps et les conditions validés peuvent être utilisés comme référence pour la configuration expérimentale. Le produit peut également être utilisé pour évaluer les anticorps TF développés en interne ou fournis par d’autres fabricants.
Utilisation prévue	Utilisation pour la recherche uniquement (RUO)	Pour usage de recherche uniquement. Non destiné à un usage diagnostique clinique direct.
Stockage	−25°C à −15°C	Conservez le bloc de paraffine dans des conditions congelées et évitez les cycles répétés de gel-dégel. Un stockage prolongé à température ambiante peut entraîner une perte d'antigène ou des lésions tissulaires et peut compromettre les performances du contrôle.
Durée de conservation	36 mois à compter de la date de fabrication	Utiliser pendant la durée de conservation spécifiée. Après la coupe, la coloration doit être effectuée dès que possible.

Notes de spécifications clés

1.stockageTempérature de

Le produit doit être conservé congelé entre −25°C et −15°C . Un stockage à long terme à 4 °C ou à température ambiante n'est pas recommandé. Un stockage inapproprié peut entraîner une dégradation ou une perte de l’antigénicité du TF, entraînant une réduction de l’intensité de la coloration dans les régions positives et compromettant les performances du contrôle.

2. Exigences de sectionnement

L' épaisseur spécifiée de 4 mm fait référence à l'épaisseur physique du bloc de paraffine, et non à l'épaisseur de la section IHC..

Pour l'analyse IHC, le bloc FFPE doit être sectionné en fines coupes de tissu, généralement de 3 à 5 μm , et monté sur des lames chargées positivement ou sur d'autres lames d'adhésion appropriées.

3. Contenu tissulaire/cellulaire

La déclaration « le contenu cellulaire peut varier »  est une spécification standard pour les matériaux de référence FFPE à base de tissus. Des variations mineures dans la composition des tissus ou des cellules peuvent survenir entre les lots de fabrication. Les caractéristiques d’expression positives/négatives attendues sont vérifiées lors de la libération du lot et ne devraient pas affecter la fonction de contrôle prévue.

4. Anticorps validé

CBPN0079 a été validé par IHC en utilisant le mAb de lapin recombinant de facteur tissulaire (S-893-34), Cat. N° S0B0577.

L’anticorps validé et les conditions de coloration associées peuvent être utilisés comme référence lors de l’établissement d’un test IHC. Lors de l’utilisation d’autres anticorps TF, les utilisateurs doivent optimiser indépendamment les conditions de coloration pertinentes.

Référence de coloration Ⅲ.IHC

CBPN0079 est publié suite à la validation de la coloration TF-IHC . Le bloc FFPE contient à la fois des régions tissulaires TF-positives et TF-négatives , fournissant un contrôle positif/négatif intégré dans un seul bloc de paraffine.

1. Interprétation de la région de contrôle positif

La région tissulaire positive devrait présenter une coloration TF claire et spécifique, avec une coloration localisée principalement à la membrane cellulaire et/ou au cytoplasme , tandis que la coloration de fond non spécifique dans les tissus environnants reste faible.

La région de contrôle positif peut être utilisée pour évaluer si le flux de travail global de l’IHC fonctionne correctement, y compris la récupération des antigènes, l’incubation des anticorps primaires et la détection chromogénique.

Coloration positive normale :  indique que le flux de travail IHC est capable de détecter l'antigène TF cible dans les conditions testées.

Coloration positive absente ou nettement réduite :  peut indiquer des problèmes tels qu'une récupération insuffisante de l'antigène, une activité réduite des anticorps, une incubation inadéquate des anticorps ou d'autres facteurs liés au test.

2. Interprétation de la région de contrôle négatif

La région tissulaire négative ne devrait présenter que peu ou pas de coloration spécifique du TF, avec une coloration de fond minime attendue.

Cette région est utilisée pour évaluer le niveau de coloration non spécifique dans le test IHC.

Coloration importante dans la région négative :  peut indiquer une liaison d'anticorps non spécifique, un blocage insuffisant, un développement chromogénique excessif ou d'autres problèmes liés au test. Ces résultats doivent être soigneusement évalués avant d’interpréter des échantillons expérimentaux.

Région négative propre avec une coloration positive adéquate :  prend en charge une bonne spécificité du test et des performances IHC appropriées dans les conditions testées.

3. Avantages de la conception à double contrôle

Les tissus témoins positifs et négatifs sont incorporés dans le même bloc FFPE et peuvent être évalués sur la même coupe de tissu . Cela garantit que la section, la déparaffinisation, la récupération de l’antigène, l’incubation des anticorps et le développement chromogénique sont effectués dans les mêmes conditions expérimentales.

Par rapport aux blocs de contrôle positifs et négatifs séparés, la conception à double contrôle minimise la variabilité causée par les différences entre les coupes de tissus et les séries expérimentales.

Ce format est particulièrement utile pour :

• Optimisation des tests IHC

• Comparaison des performances des anticorps

• Dépistage d'anticorps

• Optimisation des conditions de coloration

• Évaluation de la cohérence des tests inter-lots

• Contrôle qualité IHC de routine en laboratoire

Ⅳ.Applications clés

Le CBPN0079 peut être utilisé dans une gamme d’applications de recherche et de développement de tests liées au TF, notamment :

1. Évaluation des anticorps TF-IHC

Évaluation et criblage d'anticorps ciblant le TF pour les applications IHC.

2. Développement et optimisation des tests IHC

Optimisation des conditions de récupération des antigènes, des concentrations d'anticorps, des temps d'incubation et d'autres paramètres de coloration critiques.

3. Recherche ADC ciblée sur le TF

Développement et validation méthodologique de tests TF-IHC soutenant la recherche sur les ADC ciblés sur le TF et le développement de diagnostics compagnons.

4. Contrôle qualité IHC de routine

Contrôle qualité interne du laboratoire et surveillance des performances des tests IHC et de la cohérence du flux de travail.

5. Recherche en oncologie liée au TF

Utiliser comme contrôle expérimental pour les études portant sur l’expression du TF dans les tissus tumoraux et les mécanismes biologiques associés au TF.

Ⅴ.Recommandations de manipulation et de stockage

Minimisez l’exposition à la température ambiante.  Après avoir retiré le bloc de paraffine du stockage congelé, procéder à la section dès que possible. Remettez le bloc restant entre -25 °C et -15 °C  rapidement après la section afin de minimiser la perte potentielle d'antigène.

Utilisez des lames d’adhésion appropriées.  Des lames adhésives chargées positivement ou d'autres lames adhésives appropriées sont recommandées pour réduire le détachement des tissus lors de la récupération de l'antigène induite par la chaleur et des procédures IHC ultérieures.

Utilisation pour la recherche uniquement.  Ce produit est destiné à un usage de recherche uniquement (RUO)  et n'est pas destiné au diagnostic clinique..

Documentation du COA.  Un certificat d'analyse (COA)  est fourni pour chaque lot de produit. Il est recommandé aux utilisateurs de conserver le COA correspondant pour référence future. Le COA spécifique au lot comprend les résultats de coloration IHC utilisés pour la libération du produit et l'évaluation de la qualité.