ADN génomique α-thalassémie αα/--SEA Std

Présentation du produit

L' ADN génomique α-thalassémie αα/--SEA Std est un matériau de référence hautement caractérisé conçu pour valider les flux de travail de tests génétiques pour l'α-thalassémie, un trouble héréditaire courant de l'hémoglobine. Cette norme contient de l'ADN génomique avec le génotype αα/--SEA , qui représente le trait d'α-thalassémie le plus répandu dans les populations d'Asie du Sud-Est, où les fréquences de porteurs peuvent dépasser 15 % dans les groupes à haut risque. Conçu pour imiter des échantillons cliniques, cet étalon permet un étalonnage précis des tests de diagnostic pour détecter la délétion de l'Asie du Sud-Est (SEA), une altération génétique critique responsable d'environ 70 % des cas d'α-thalassémie dans les régions endémiques. Il constitue un outil de contrôle qualité essentiel pour les laboratoires effectuant le dépistage des porteurs, le diagnostic prénatal et les tests néonatals pour les hémoglobinopathies.

Caractéristiques du produit

Génotype cliniquement pertinent

Le standard porte le génotype à délétion αα/--SEA , composé de deux gènes normaux d'α-globine (αα) sur un chromosome 16 et d'une délétion complète des deux gènes d'α-globine (--SEA) sur le chromosome homologue. Ce génotype représente le trait d'α-thalassémie le plus courant, associé à une production réduite de chaîne α-globine et à une légère anémie microcytaire. Le point d'arrêt de suppression (chr16: 215396-234699 del) est cartographié avec précision à l'aide du tableau haute résolution CGH .

Validé orthogonalement

Le statut de suppression SEA est vérifié par plusieurs méthodes complémentaires :

• Gap-PCR avec des amorces allèles spécifiques (spécificité > 99 %)

• Séquençage de nouvelle génération (couverture > 300x sur le locus α-globine)

Compatibilité matricielle

Purifié à partir de sang total à l'aide de protocoles standardisés pour conserver les caractéristiques natives de l'ADN, notamment :

• ADN génomique de haut poids moléculaire

• Contamination résiduelle par ARN <0,1 ng/μL

• Compatible avec toutes les méthodes courantes d'extraction et d'amplification d'ADN

Usage

Préparation des échantillons

Reconstituer l'étalon dans 200 μL de tampon TE (pH 8,0) pour atteindre une concentration de travail de 50 ng/μL . Laisser réhydrater à température ambiante pendant 20 minutes en mélangeant délicatement. Préparer des dilutions en série (1 à 100 ng/μL) pour établir la linéarité du test et la limite de détection.

Validation des tests

Incorporer dans les exécutions de validation pour :

• Vérifier la précision de la détection des suppressions SEA sur toutes les plateformes.

• Établir des conditions de cycle PCR optimales pour les tests gap-PCR

• Surveiller la variabilité inter-exécutions dans l'appel du génotype

Apport recommandé : 50 à 100 ng d’ADN par réaction pour les méthodes basées sur la PCR.

Stockage

Conserver les flacons non ouverts entre 2 et 8 °C pendant 36 mois maximum à compter de la date de fabrication. 

FAQ

Qu’est-ce qui rend la suppression du SEA cliniquement significative ?

La suppression --SEA supprime les deux gènes d'α-globine d'un chromosome, réduisant ainsi la production totale d'α-globine de 50 % chez les porteurs (αα/--SEA). Bien que les porteurs soient généralement asymptomatiques, les couples dont les deux partenaires sont porteurs de traits d'α-thalassémie ont un risque de 25 % d'avoir un enfant atteint d'une maladie grave de l'hémoglobine H ou d'anasarque fœtale.

Comment cette norme améliore-t-elle la validation des tests ?

Il fournit une référence bien caractérisée avec un génotype connu, permettant aux laboratoires de vérifier leur capacité à identifier correctement la délétion SEA et à la distinguer des autres mutations de l'α-thalassémie (délétions de 3,7 kb, 4,2 kb). Ceci est essentiel pour un dépistage précis des porteurs et un diagnostic prénatal.

Peut-il être utilisé avec les panneaux NGS ?

Oui, la norme est optimisée pour une utilisation avec les panels NGS d’hémoglobinopathie, offrant une couverture uniforme sur l’ensemble du groupe de gènes α-globine (HBZ, HBA2, HBA1). Il comprend un rapport de validation de couverture pour les panels commerciaux courants (Illumina TruSight Hemato, Thermo Fisher Oncomine Myeloid Assay).

Un contrôle de type sauvage est-il inclus ?

Chaque lot comprend un contrôle d'ADN génomique de type sauvage apparié (génotype αα/αα) provenant de la même origine ethnique, permettant une validation simultanée de la spécificité du test et de la différenciation entre les génotypes normaux et porteurs.