Si el sitio deseado no se puede encontrar en la muestra natural, podemos utilizar tecnología de ingeniería celular para editar ubicaciones cromosómicas específicas. La línea celular editada tiene puntos de interrupción claros y es completamente idéntica a la secuencia natural, lo que permite una detección estable a nivel de ARN y prueba la sensibilidad, especificidad y estabilidad de la detección de genes de fusión.
El proceso es el siguiente:
1. Ingeniería celular: Síntesis in vitro del fragmento del gen de fusión y transferencia a una muestra de células naturales para generar células que contengan la variante de fusión;
2. Amplificación: Cultivo celular y amplificación de pases;
3. Extracción: Se extrae el ARN de las células amplificadas;
4. Validación: La verificación del control de calidad se realiza mediante secuenciación Sanger y PCR digital. Si se requiere una prueba de fusión %AF o de número de copias, también realizamos una verificación dPCR.