Descripción general del producto
El estándar de referencia de eliminación de MLH1 heterocigoto para control de calidad de IVD es un material de referencia meticulosamente caracterizado diseñado para el control de calidad de ensayos de diagnóstico que detectan deleciones heterocigotas en el gen MLH1 , un componente clave del sistema de reparación de errores de coincidencia (MMR). Este estándar de diagnóstico in vitro (IVD) contiene ADN genómico con una deleción heterocigótica confirmada que abarca los exones 5 a 8 de MLH1, imitando las alteraciones genéticas observadas en el síndrome de Lynch y los cánceres colorrectales esporádicos. Fabricado según las pautas ISO 13485, proporciona una referencia consistente para validar la exactitud y precisión de los flujos de trabajo de detección de eliminación de MLH1 en laboratorios clínicos. Con una frecuencia alélica del 50 % calibrada con precisión para el alelo eliminado, este estándar es esencial para garantizar resultados confiables en las pruebas de deficiencia de MMR, que guían las estrategias de detección y prevención del cáncer.
Características del producto
Arquitectura de eliminación definida
Contiene una eliminación heterocigótica precisa de los exones 5-8 de MLH1 con puntos de interrupción bien caracterizados (chr3:37035121-37042897), verificada mediante hibridación genómica comparativa de matrices (aCGH) y PCR digital en gotas (ddPCR). La eliminación abarca 7776 pares de bases , eliminando regiones codificantes críticas implicadas en la formación del complejo MMR. Esto permite una validación precisa de los límites de detección de eliminación y el mapeo de puntos de interrupción.
Correlación de fenotipo MMR
Derivado de una línea celular derivada de un paciente con características confirmadas de deficiencia de MMR:
• Inestabilidad de microsatélites (MSI-H) en el 90% de los marcadores
• Expresión reducida de la proteína MLH1 (30% de los niveles normales por IHC)
• Deterioro de la actividad de reparación de discordancias (reducción del 40 % en el ensayo funcional)
• Expresión PMS2 preservada (para distinguir la deficiencia específica de MLH1)
Métricas de rendimiento cuantitativas
El estándar se cuantifica en 50 ng/μL con valores de número de copias verificados mediante ddPCR:
• 1 copia de los exones 5-8 de MLH1 (alelo eliminado)
• 2 copias de los exones 1-4 y 9-19 de MLH1 (regiones intactas)
• 2 copias del gen de control EIF2C1 (chr1:162214554-162220423)
Esto permite una validación precisa de los ensayos de detección de variación del número de copias (CNV).
Uso
Validación del ensayo IVD
Úselo para validar los métodos de detección de eliminación de MLH1, incluidos:
• Amplificación de sonda dependiente de ligadura múltiple (MLPA)
• Paneles NGS específicos con algoritmos de llamadas CNV
• Ensayos de cuantificación de deleción basados en ddPCR
• plataformas aCGH
Entrada recomendada: 200 ng de ADN por ensayo para un rendimiento óptimo.
Implementación del Control de Calidad
Intégrelo en los protocolos de control de calidad del laboratorio para:
• Supervisar el rendimiento del lote de reactivos para la detección de eliminaciones
• Verificar la competencia del técnico en la interpretación de perfiles de eliminación de MLH1
• Establecer reproducibilidad entre series (CV objetivo <5%)
• Garantizar el cumplimiento de los requisitos CAP/CLIA para las pruebas del síndrome de Lynch
Instrucciones de manejo
Almacenar a -20°C por hasta 36 meses desde la fecha de fabricación. En el primer uso, haga alícuotas en volúmenes de un solo uso (20 μl) utilizando una técnica estéril. Evite ciclos repetidos de congelación y descongelación (máximo 3 ciclos). Descongelar en hielo durante 15 minutos antes de usar y mezclar suavemente pipeteando.
Preguntas frecuentes
¿Por qué es importante la prueba de deleción de MLH1 para el diagnóstico del cáncer?
Las deleciones heterocigotas de MLH1 causan el síndrome de Lynch , una predisposición hereditaria a cáncer colorrectal, endometrial y otros cánceres con riesgos de por vida de hasta el 70%. La detección precisa permite pruebas predictivas, pruebas mejoradas e intervenciones preventivas para personas y familias en riesgo.
¿Cómo respalda este estándar el cumplimiento normativo de IVD?
Cumple con los requisitos IVD de la FDA y la CE para materiales de referencia, incluida la trazabilidad según estándares internacionales, datos de caracterización completos y estudios de estabilidad. La documentación incluye informes de validación, estimaciones de incertidumbre y características de rendimiento en todas las plataformas.
¿Se puede utilizar con flujos de trabajo de prueba de MSI?
Sí, el fenotipo MSI-H asociado permite la validación simultánea de los flujos de trabajo de detección de eliminación de MLH1 y clasificación de MSI. Esto proporciona una solución integral de control de calidad para laboratorios que ofrecen pruebas combinadas de deficiencia de MMR.
¿Qué controles se incluyen para la especificidad del ensayo?
Cada estándar incluye un control de ADN genómico de tipo salvaje del mismo origen genético, lo que permite una evaluación paralela de la especificidad del ensayo, las tasas de falsos positivos y la discriminación entre estados de deleción heterocigotos y homocigotos.
Información del producto |
Estándar de referencia de eliminación MLH1 |
ID de catálogo |
CBPR0001 |
Formato |
ADN genómico |
Uso previsto |
Sólo para uso en investigación |
Tamaño de la unidad |
1ug |
Secuenciación de Sanger |
Descargar |
Almacenamiento |
2-8°C |
Expiración |
36 meses desde la fecha de fabricación. |
Datos técnicos
Información del producto |
Estándar de referencia de eliminación MLH1 |
Gene |
MLH1 |
Cambio de ADN |
N / A |
Cambio AA |
N / A |
cigosidad |
heterocigoto |
Frecuencia alélica |
50% |
Posición del reloj (GRCh37) |
chr3:37051418-37078384 del |
Buffer |
Tris-EDTA |
Aplicación del producto
1.Evaluar la estabilidad del experimento y el proceso de análisis.
2.Productos de control de calidad/referencia negativos y negativos
