Doble mutación β-talasemia Ref Std Research

Descripción general del producto

Double Mutation β-Talasemia Ref Std Research es un material de referencia especializado diseñado para validar flujos de trabajo de investigación que investigan genotipos complejos de β-talasemia. Este estándar contiene ADN genómico con dos mutaciones clínicamente significativas en el gen de la β-globina: IVS-II-110 (G>A) y Codón 39 ( C>T ) , presentes en estado heterocigoto compuesto. Estas mutaciones representan una de las combinaciones de mutaciones más prevalentes asociadas con la β-talasemia intermedia en las poblaciones del sudeste asiático, donde este genotipo representa aproximadamente el 35% de los casos de β-talasemia clínicamente significativos. Diseñado para imitar la complejidad genética de las muestras clínicas, este estándar permite una validación precisa de los ensayos de detección de mutaciones múltiples utilizados en la investigación y el desarrollo terapéutico de la β-talasemia.

Características del producto

Representación del genotipo complejo

Lleva dos mutaciones patógenas de β-talasemia en configuración trans:

• IVS-II-110 (G>A)  (Cambio de ADN: c.93-21G>A)

• Codón 39 ( C>T ) ( Cambio de ADN: c.118C>T )

Cada mutación se cuantifica con una frecuencia de alelos de ~ 50 % mediante ddPCR, lo que refleja el estado heterocigoto compuesto. El estado de la mutación se verifica mediante análisis de haplotipos para confirmar la configuración trans.

Validación de plataforma

La detección de mutaciones se confirma en múltiples plataformas de investigación:

• NGS de lectura larga (cobertura >100x en todo el grupo de genes HBB)

• Secuenciación de Sanger del gen de la β-globina (exón 1-3 y regiones flanqueantes)

Formato listo para la investigación

Purificado para soportar aplicaciones de investigación avanzada:

• ADN de alto peso molecular (>40 kb) adecuado para secuenciación de lectura larga

• <0,001 % de contaminación microbiana (verificada mediante PCR de ARNr 16S)

• Modificaciones epigenéticas preservadas en la región de control del locus de β-globina

• Compatible con flujos de trabajo de evaluación de la eficiencia de edición CRISPR

Uso

Desarrollo de ensayos

Utilice una entrada de 100 ng para optimizar los ensayos de detección de mutaciones múltiples:

• Diseñar y validar paneles de PCR multiplex

• Optimice la preparación de la biblioteca NGS a partir de muestras de baja calidad.

• Establecer canales bioinformáticos para llamadas de genotipos complejos

• Desarrollar métodos de cuantificación específicos de alelos.

Aplicaciones de investigación terapéutica

Incorporar a la investigación de terapia génica para:

• Validar la eficiencia de la edición de genes para ambas mutaciones.

• Evaluar cambios de expresión específicos de alelos

• Monitorear efectos fuera del objetivo en la edición del locus de globina β

• Estandarizar los ensayos funcionales de producción de hemoglobina.

Requisitos de almacenamiento

Almacenar a 2-8°C en su embalaje original hasta por 36 meses. Después del primer uso, dividir en alícuotas en volúmenes de un solo uso (50 μl) y almacenar a -80 °C. Evite más de 2 ciclos de congelación y descongelación. Descongelar en hielo durante 20 minutos antes de usar y mezclar suavemente pipeteando.

Preguntas frecuentes

¿Por qué es clínicamente importante esta combinación de doble mutación?

El IVS-II-110 /Codón 39 genotipo típicamente produce β-talasemia intermedia, caracterizada por anemia moderada que requiere transfusiones ocasionales. Este genotipo exhibe una gravedad clínica variable, lo que lo convierte en un modelo importante para estudiar genes modificadores y desarrollar terapias dirigidas.

¿Cómo apoya este estándar la reproducibilidad de la investigación?

Proporciona una referencia consistente para comparar resultados entre estudios que investigan genotipos complejos de β-talasemia. Las frecuencias de mutación definidas permiten una calibración precisa de ensayos cuantitativos, lo que reduce la variabilidad entre laboratorios en la detección de mutaciones y el análisis de expresión.

¿Se puede utilizar para la validación de métodos de diagnóstico prenatal?

Sí, el estándar es adecuado para validar métodos de pruebas prenatales no invasivas (NIPT) para la β-talasemia, incluido el análisis de ADN libre de células. Permite evaluar la sensibilidad del ensayo para detectar ambas mutaciones en fondos de ADN mixtos.

¿Qué datos de caracterización adicionales se proporcionan?

Cada lote incluye un análisis completo de haplotipos del grupo de genes de β-globina (HBB, HBD, HBG1, HBG2), perfiles de metilación de la región de control del locus y datos de expresión de modelos de cultivo de células progenitoras eritroides.