डबल म्यूटेशन β-थैलेसीमिया रेफ एसटीडी अनुसंधान

उत्पाद अवलोकन

डबल म्यूटेशन β-थैलेसीमिया रेफ एसटीडी रिसर्च एक विशेष संदर्भ सामग्री है जिसे जटिल β-थैलेसीमिया जीनोटाइप की जांच करने वाले अनुसंधान वर्कफ़्लो को मान्य करने के लिए डिज़ाइन किया गया है। इस मानक में दो नैदानिक ​​​​रूप से महत्वपूर्ण β-ग्लोबिन जीन उत्परिवर्तन के साथ जीनोमिक डीएनए शामिल है: IVS-II-110 (G>A) और कोडन 39 ( C>T ) , जो यौगिक विषमयुग्मजी अवस्था में मौजूद हैं। ये उत्परिवर्तन दक्षिण पूर्व एशियाई आबादी में β-थैलेसीमिया इंटरमीडिया से जुड़े सबसे प्रचलित उत्परिवर्तन संयोजनों में से एक का प्रतिनिधित्व करते हैं, जहां यह जीनोटाइप नैदानिक ​​​​रूप से महत्वपूर्ण β-थैलेसीमिया मामलों का लगभग 35% है। नैदानिक ​​​​नमूनों की आनुवंशिक जटिलता की नकल करने के लिए इंजीनियर किया गया, यह मानक β-थैलेसीमिया अनुसंधान और चिकित्सीय विकास में उपयोग किए जाने वाले बहु-उत्परिवर्तन पहचान परीक्षणों के सटीक सत्यापन को सक्षम बनाता है।

उत्पाद की विशेषताएँ

जटिल जीनोटाइप प्रतिनिधित्व

ट्रांस कॉन्फ़िगरेशन में दो रोगजनक β-थैलेसीमिया उत्परिवर्तन होते हैं:

• आईवीएस-II-110 (जी>ए)  (डीएनए परिवर्तन: सी.93-21जी>ए)

• कोडन 39 ( सी>टी ) ( डीएनए परिवर्तन: सी.118सी>टी )

प्रत्येक उत्परिवर्तन को डीडीपीसीआर द्वारा ~ 50% एलील आवृत्ति पर निर्धारित किया जाता है , जो यौगिक विषमयुग्मजी अवस्था को दर्शाता है। ट्रांस कॉन्फ़िगरेशन की पुष्टि के लिए उत्परिवर्तन स्थिति को हैप्लोटाइप विश्लेषण द्वारा सत्यापित किया जाता है।

प्लेटफ़ॉर्म सत्यापन

कई शोध प्लेटफार्मों पर उत्परिवर्तन का पता लगाने की पुष्टि की गई है:

• लंबे समय से पढ़ा जाने वाला एनजीएस (>एचबीबी जीन क्लस्टर में 100x कवरेज)

• β-ग्लोबिन जीन का सेंगर अनुक्रमण (एक्सॉन 1-3 और फ़्लैंकिंग क्षेत्र)

अनुसंधान के लिए तैयार प्रारूप

उन्नत अनुसंधान अनुप्रयोगों का समर्थन करने के लिए शुद्ध किया गया:

• उच्च आणविक भार डीएनए (>40 केबी) लंबे समय तक पढ़े जाने वाले अनुक्रमण के लिए उपयुक्त है

• <0.001% माइक्रोबियल संदूषण (16एस आरआरएनए पीसीआर द्वारा सत्यापित)

• β-ग्लोबिन लोकस नियंत्रण क्षेत्र में संरक्षित एपिजेनेटिक संशोधन

• सीआरआईएसपीआर संपादन दक्षता मूल्यांकन वर्कफ़्लो के साथ संगत

प्रयोग

परख विकास

पर उपयोग करें : 100 एनजी इनपुट मल्टी-म्यूटेशन डिटेक्शन एसेज़ के अनुकूलन के लिए

• मल्टीप्लेक्स पीसीआर पैनलों को डिजाइन और मान्य करें

• निम्न-गुणवत्ता वाले नमूनों से एनजीएस लाइब्रेरी की तैयारी को अनुकूलित करें

• जटिल जीनोटाइप कॉलिंग के लिए जैव सूचना विज्ञान पाइपलाइन स्थापित करें

• एलील-विशिष्ट परिमाणीकरण विधियां विकसित करें

चिकित्सीय अनुसंधान अनुप्रयोग

जीन थेरेपी अनुसंधान में शामिल करें:

• दोनों उत्परिवर्तनों के लिए जीन संपादन दक्षता को मान्य करें

• एलील-विशिष्ट अभिव्यक्ति परिवर्तनों का आकलन करें

• β-ग्लोबिन लोकस संपादन में ऑफ-टार्गेट प्रभावों की निगरानी करें

• हीमोग्लोबिन उत्पादन की कार्यात्मक परख को मानकीकृत करें

भंडारण आवश्यकताएँ

मूल पैकेजिंग में पर 2-8 डिग्री सेल्सियस 36 महीने तक स्टोर करें। पहले उपयोग के बाद, एकल-उपयोग मात्रा (50 μL) में विभाजित करें और -80°C पर संग्रहित करें। 2 से अधिक फ्रीज-पिघलना चक्रों से बचें। उपयोग करने से पहले 20 मिनट के लिए बर्फ पर पिघलाएं और पाइपिंग द्वारा धीरे से मिलाएं।

अक्सर पूछे जाने वाले प्रश्न

यह दोहरा उत्परिवर्तन संयोजन चिकित्सकीय दृष्टि से महत्वपूर्ण क्यों है?

आईवीएस- II-110 /कोडन 39 जीनोटाइप के परिणामस्वरूप आम तौर पर β-थैलेसीमिया इंटरमीडिया होता है, जिसमें मध्यम रक्ताल्पता की विशेषता होती है, जिसके लिए कभी-कभी रक्त आधान की आवश्यकता होती है। यह जीनोटाइप परिवर्तनशील नैदानिक ​​गंभीरता प्रदर्शित करता है, जो इसे संशोधक जीन का अध्ययन करने और लक्षित उपचार विकसित करने के लिए एक महत्वपूर्ण मॉडल बनाता है।

यह मानक अनुसंधान प्रतिलिपि प्रस्तुत करने योग्यता का समर्थन कैसे करता है?

यह जटिल β-थैलेसीमिया जीनोटाइप की जांच करने वाले अध्ययनों के परिणामों की तुलना करने के लिए एक सुसंगत संदर्भ प्रदान करता है। परिभाषित उत्परिवर्तन आवृत्तियाँ मात्रात्मक परख के सटीक अंशांकन को सक्षम करती हैं, उत्परिवर्तन का पता लगाने और अभिव्यक्ति विश्लेषण में अंतर-प्रयोगशाला परिवर्तनशीलता को कम करती हैं।

क्या इसका उपयोग प्रसवपूर्व निदान विधियों के सत्यापन के लिए किया जा सकता है?

हां, मानक सेल-मुक्त डीएनए विश्लेषण सहित β-थैलेसीमिया के लिए गैर-इनवेसिव प्रीनेटल परीक्षण (एनआईपीटी) तरीकों को मान्य करने के लिए उपयुक्त है। यह मिश्रित डीएनए पृष्ठभूमि में दोनों उत्परिवर्तन का पता लगाने के लिए परख संवेदनशीलता का आकलन करने में सक्षम बनाता है।

कौन सा अतिरिक्त लक्षण वर्णन डेटा प्रदान किया गया है?

प्रत्येक लॉट में β-ग्लोबिन जीन क्लस्टर (HBB, HBD, HBG1, HBG2) का व्यापक हैप्लोटाइप विश्लेषण, लोकस नियंत्रण क्षेत्र की मिथाइलेशन प्रोफाइलिंग और एरिथ्रोइड पूर्वज सेल संस्कृति मॉडल से अभिव्यक्ति डेटा शामिल है।